反相色譜(RPC)是指利用非極性的反相介質(zhì)為固定相，極性有機(jī)溶1劑的水溶液為流動(dòng)相，根據(jù)溶質(zhì)極性(疏水性)的差別進(jìn)行溶質(zhì)分離與純化的洗脫色譜法。與HIC一樣，RPC中溶質(zhì)也通過(guò)疏水性相互作用分配于固定相表面，但是，RPC固定相表面完全被非極性基團(tuán)所覆蓋，表現(xiàn)出強(qiáng)烈的疏水性。因此，必須用極性有機(jī)溶1劑或其水溶液進(jìn)行溶質(zhì)的洗脫分離。溶質(zhì)在反相介質(zhì)上的分配系數(shù)取決于溶質(zhì)的疏水性，一般疏水性越大，分配系數(shù)越大。初始階段基線應(yīng)持續(xù)上升，在到達(dá)老化溫度后5-10分鐘開(kāi)始下降，并且會(huì)持續(xù)30-90分鐘。當(dāng)固定相一定時(shí)，可以通過(guò)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的組成調(diào)整溶質(zhì)的分配系數(shù)。RPC主要應(yīng)用于相對(duì)分子質(zhì)量低于5000，特別是1000以下的非極性小分子物質(zhì)的分析和純化，也可以用于蛋白質(zhì)等生物大分子的分析和純化。由于反相介質(zhì)表面為強(qiáng)烈疏水性，并且流動(dòng)相為低極性的有機(jī)溶1劑，生物活性大分子在RPC分離過(guò)程中容易變性失活，所以，以回收生物活性蛋白質(zhì)為目的時(shí)，應(yīng)注意選用適宜的反相介質(zhì)。

塞桿密封墊 現(xiàn)象：在高壓下壓力不穩(wěn)定，從泵頭滲漏流動(dòng)相液體，反映在分析結(jié)果上是樣品保留時(shí)間的改變。以前填料純化技術(shù)不是很成熟，十八烷基鍵合到硅膠表面不是很完全，硅膠上總是少量的硅羥基在外面。原因：墊圈與運(yùn)動(dòng)著的柱塞桿緊緊接觸，是液相色譜系統(tǒng)中易磨損的部件。緩沖液或其它含鹽的流動(dòng)相更加速墊圈的磨損。墊圈磨損是不可避免的。措施：一旦墊圈損壞只有進(jìn)行更換。更換時(shí)注意要將柱塞桿縮至后，松開(kāi)泵頭的兩根收緊螺釘，操作時(shí)處處以平衡的動(dòng)作進(jìn)行，切不可搖動(dòng)或上下擺動(dòng)泵頭，否則柱塞桿極易折斷。

LC-100液相色譜系統(tǒng)分析前準(zhǔn)備：　　1、流動(dòng)相前處理：將流動(dòng)相經(jīng)過(guò)0.45um的微孔濾膜過(guò)濾后，倒入流動(dòng)相瓶中，放入超聲波清洗器內(nèi)震蕩排氣20分鐘左右。有兩種方式推薦：（1）的方式當(dāng)然是購(gòu)買實(shí)驗(yàn)室專用純水機(jī)，既方便又可靠，質(zhì)量也放心。　　2、流動(dòng)相安裝：將處理好的流動(dòng)相放在儲(chǔ)液托盤上，將對(duì)應(yīng)通道的洗液管路分別放入流動(dòng)相瓶中，蓋好瓶蓋并記好對(duì)應(yīng)通道的流動(dòng)相種類?！　?、樣品記錄：將樣品處理稀釋后使用注射1器過(guò)濾頭過(guò)濾后裝入1.5ml樣品瓶中（大約三分之二），放入自動(dòng)進(jìn)樣器的樣品架上，并記錄樣品瓶位置以便設(shè)置批處理文件。　　4、色譜柱安裝：打開(kāi)柱溫箱門，將色譜柱的出口端安裝在色譜柱夾具上，在色譜柱上連接配管，在色譜柱出口端連接檢測(cè)器入口端的藍(lán)色PEEK管?！　?、檢查清洗液：在RINSE通道內(nèi)放置50%甲1醇：水溶液；含有兩根管路的通道內(nèi)放置10%異丙1醇：水溶液。