蛋白質結晶方法

液-液擴散(Liquid–Liquid Diffusion) 這種方法中，蛋白質溶液和含有沉淀劑的溶液是彼此分層在一個有小孔的毛細管中，一個測熔點用的毛細管一般即可（如圖1.2）。下層是密度大的溶液，例如銨或PEG溶液。如果如MPD被用作沉淀劑，它會在上層。以1：1混合，沉淀劑的濃度應該是所期終濃度的二倍。兩種溶液（各自約5μl）通過針頭導入毛細管，先導入下層的。通過一個簡易的搖擺式離心機去除氣泡。再加入上層，進而兩層之間形成一個明顯的界面，它們會逐漸彼此擴散。 Garc′?a-Ruiz and Moreno（1994）已經(jīng)發(fā)展液-液擴散技術至法。蛋白質溶液通過毛細力被吸入狹窄的管中，管的一端是封閉的。接著，開放端入置于小容器的凝膠中，凝膠使得管豎直，蛋白質溶液與凝膠接觸。含有沉淀劑的溶液被倒在凝膠上，整個裝置被保存于封閉的盒子以防蒸發(fā)。沉淀劑通過凝膠和毛細管的擴散時間可以由毛細管插入凝膠的深度控制，從而蛋白質溶液中即可形成過飽和區(qū)域，毛細管底部高而頂部低。這也可作為一個篩選佳結晶條件的額外信息。

蛋白質晶體板結構

多肽分子中前一個殘基中羰基碳原子與后一個殘基中的氨基氮原子之間形成一個肽鏈。多肽分子以氨基端為頭，而以羧基端為尾。組成蛋白質分子的α-氨基酸都是L-異構體，其構型見圖2。圖2每個氨基酸或其殘基中羧酸根α位上的碳原子 Cα直接與氫原子、氨基和側鏈R基相連。在L-異構體中,從Cα向R 看 時,按順時針順序排列是H、NH幦和COO。存在于蛋白質分子中的20種氨基酸各以其側鏈R基而相區(qū)別。

蛋白結晶板

形核劑的添加使蛋白質晶體異相形核,相較于均相形核其需要克服的阻力小,形核勢壘低.因而形核劑的使用對于難結晶蛋白或者起始濃度過低的蛋白質結晶具有重要意義.隨著結構生物學的發(fā)展,形核劑在蛋白質結晶中的研究仍是結晶方法學領域的熱點問題.多孔微球對蛋白質分子的吸附作用有利于無序蛋白質分子團簇的形成,進而促進蛋白質形核.添加多孔微球不但可以增加結晶條件篩選數(shù),也可以提高晶體質量.促進蛋白質分子有序排列的形核劑籽晶的使用,使晶體的形核生長過程始終處于結晶體系溶液濃度較低的狀態(tài),而交聯(lián)的籽晶因為穩(wěn)定性更高而更有應用前景.新型交互擴散結晶板中。

蛋白質晶體板

半胱氨酸、賴氨酸的蛋白質、以及含有金屬離子的蛋白質。這些蛋白質的吸附會導致重組蛋白質純度大幅降低。為了解決這一問題,我們制備了兩類新材料,用于提高重組蛋白質純度:1)通過分子印跡技術,以組氨酸標簽為模板,在IMAC材料表面形成組氨酸標簽的分子印跡層,使得不含組氨酸標簽的蛋白質無法靠近IMAC材料,從而提高重組蛋白純度;2)通過活性可控自由基聚合,在IMAC基質材料表面包被了一層尺寸可控的聚合物涂層。在聚合物網(wǎng)絡的篩分作用下,進而實現(xiàn)帶組氨酸標簽的重組蛋白的純化。