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蛋白質(zhì)結(jié)晶方法
液-液擴散(Liquid–Liquid Diffusion) 這種方法中,蛋白質(zhì)溶液和含有沉淀劑的溶液是彼此分層在一個有小孔的毛細管中,一個測熔點用的毛細管一般即可(如圖1.2)。下層是密度大的溶液,例如銨或PEG溶液。如果如MPD被用作沉淀劑,它會在上層。以1:1混合,沉淀劑的濃度應該是所期終濃度的二倍。兩種溶液(各自約5μl)通過針頭導入毛細管,先導入下層的。通過一個簡易的搖擺式離心機去除氣泡。再加入上層,進而兩層之間形成一個明顯的界面,它們會逐漸彼此擴散。 Garc′?a-Ruiz and Moreno(1994)已經(jīng)發(fā)展液-液擴散技術(shù)至法。蛋白質(zhì)溶液通過毛細力被吸入狹窄的管中,管的一端是封閉的。接著,開放端入置于小容器的凝膠中,凝膠使得管豎直,蛋白質(zhì)溶液與凝膠接觸。含有沉淀劑的溶液被倒在凝膠上,整個裝置被保存于封閉的盒子以防蒸發(fā)。沉淀劑通過凝膠和毛細管的擴散時間可以由毛細管插入凝膠的深度控制,從而蛋白質(zhì)溶液中即可形成過飽和區(qū)域,毛細管底部高而頂部低。這也可作為一個篩選佳結(jié)晶條件的額外信息。
普通蛋白結(jié)晶板
在普通24孔板的基礎(chǔ)上發(fā)展出來用于結(jié)晶學研究。透明的PS材料,平整無變形的底提供了優(yōu)異的光學性能。孔緣突出于板面,減少孔間污染的風險。在“沉滴”(Sitting Drop)中,需要用到“微橋”(Micro-Bridges),結(jié)晶過程中或之后,“微橋”可以轉(zhuǎn)移到另外一個孔??捎肰IEWseal?(676070)密封,也可以用蓋玻片通過硅油密封每一孔。
用于油下結(jié)晶(Microbatch),梯形的孔形可將樣品溶液集中于孔*,平的底部可在顯微鏡下觀察結(jié)晶的生長。
蛋白結(jié)晶板技術(shù)
提出來的一項新型的分析技術(shù),是當前分析科學活躍的發(fā)展領(lǐng)域之一,代表了新世紀分析儀器的發(fā)展方向。微流控芯片的發(fā)展有賴于不斷出現(xiàn)的微機電加工技術(shù),微流控芯片的結(jié)構(gòu)越來越復雜,功能也越來越多樣化,由此,研究和探索簡便的加工技術(shù)成為微流控技術(shù)發(fā)展的一個重要組成部分,本的研究工作將圍繞著微流控蛋白質(zhì)結(jié)晶芯片不同材料的性能與功能要求來進行相關(guān)加工技術(shù)的探討。 蛋白質(zhì)結(jié)晶微流控芯片是一種用于蛋白質(zhì)結(jié)品條件高通量、快速篩選的新設備,對于結(jié)構(gòu)生物學的發(fā)展具有重要意義,是目前研究的熱點。本根據(jù)蛋白質(zhì)結(jié)晶系統(tǒng)的要求,設計了具有雙層結(jié)構(gòu)的微流控芯片。