蛋白質(zhì)結(jié)晶方法

結(jié)晶方法(Crystallization Techniques)1.1.1 分批結(jié)晶(Batch Crystallization) 這是老的簡(jiǎn)單的結(jié)晶方法，其原理是同步地在蛋白質(zhì)溶液中加入沉淀劑，立即使溶液達(dá)到一個(gè)高過飽和狀態(tài)。幸運(yùn)的話，不需進(jìn)一步處理即可在過飽和溶液中逐漸長(zhǎng)出晶體。一個(gè)用于微分批結(jié)晶的自動(dòng)化系統(tǒng)已被Chayen等人設(shè)計(jì)出（1991，1992），其微分批方法中，他們?cè)?-2μl包含蛋白質(zhì)和沉淀劑的液滴中生長(zhǎng)晶體。液滴被懸浮在油（如石蠟）中，油的作用是作為封層以防止蒸發(fā)，它并不干擾普通沉淀劑，但是干擾能溶解油的(Chayen, 1997; see also Chayen, 1998)。

蛋白質(zhì)晶體板結(jié)構(gòu)

研究蛋白質(zhì)晶體結(jié)構(gòu)及其性質(zhì)的晶體學(xué)分支學(xué)科。蛋白質(zhì)是由眾多的α-氨基酸作為單體縮合而成的多肽鏈通過交聯(lián)構(gòu)成的。多肽鏈的氨基酸及其交聯(lián)位置代表蛋白質(zhì)分子的一級(jí)結(jié)構(gòu)，而多肽鏈按一定方式在空間分布則形成二級(jí)結(jié)構(gòu)(如α-螺旋和早折疊片等)和三級(jí)立體結(jié)構(gòu)(如多肽鏈折疊為球形)，作為亞基的三級(jí)結(jié)構(gòu)還可聚集成四級(jí)結(jié)構(gòu)等。

蛋白結(jié)晶板作用

隨著人類基因組測(cè)序計(jì)劃的完成 ,鑒定細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)表達(dá),結(jié)構(gòu),功能及相互作用方式等成為后基因組時(shí)代的主要目標(biāo)之一.為此 ,需要高通量的蛋白質(zhì)組學(xué)研究的技術(shù)和方法.近年來出現(xiàn)的表面增強(qiáng)激光解吸 /電離，蛋白質(zhì)芯片技術(shù)是一種操作簡(jiǎn)單 ,方便快捷 ,樣本需要量少 ,敏感性高 ,特異性強(qiáng)的高通量的研究蛋白組學(xué)的方法 ,在蛋白質(zhì)功能分析,標(biāo)志物篩選,研發(fā)等方面具有廣泛的應(yīng)用前景。

蛋白結(jié)晶板

形核劑的添加使蛋白質(zhì)晶體異相形核,相較于均相形核其需要克服的阻力小,形核勢(shì)壘低.因而形核劑的使用對(duì)于難結(jié)晶蛋白或者起始濃度過低的蛋白質(zhì)結(jié)晶具有重要意義.隨著結(jié)構(gòu)生物學(xué)的發(fā)展,形核劑在蛋白質(zhì)結(jié)晶中的研究仍是結(jié)晶方法學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)問題.多孔微球?qū)Φ鞍踪|(zhì)分子的吸附作用有利于無序蛋白質(zhì)分子團(tuán)簇的形成,進(jìn)而促進(jìn)蛋白質(zhì)形核.添加多孔微球不但可以增加結(jié)晶條件篩選數(shù),也可以提高晶體質(zhì)量.促進(jìn)蛋白質(zhì)分子有序排列的形核劑籽晶的使用,使晶體的形核生長(zhǎng)過程始終處于結(jié)晶體系溶液濃度較低的狀態(tài),而交聯(lián)的籽晶因?yàn)榉€(wěn)定性更高而更有應(yīng)用前景.新型交互擴(kuò)散結(jié)晶板中。