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為檢驗(yàn)飲用水是否達(dá)到衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn),需要進(jìn)行水中的細(xì)菌數(shù)量及大腸菌群數(shù)的測定。細(xì)菌總數(shù)可以說明水質(zhì)被污染的程度,一般來說,細(xì)菌數(shù)量越多,污染的程度越高。大腸菌群是大量出現(xiàn)在糞便中的非致病菌,從其數(shù)量的多少可判斷水源被人畜排泄物污染的程度,所以大腸桿菌可作為糞便污染的指示菌。國家飲用水標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,飲用水中大腸菌群數(shù)不超過3CFU/L,細(xì)菌總數(shù)不超過100CFU/mL。2005年6月開始,城市供水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)有所提高,自來水中細(xì)菌菌落數(shù)不得超過80CFU/mL,任意取100mL水樣不得檢出大腸桿菌。因此,對水中的細(xì)菌數(shù)量及大腸菌群數(shù)的檢驗(yàn)是保證飲用水安全和控制傳ran病的有效手段,同時(shí)也是評價(jià)水質(zhì)狀況的重要指標(biāo)。
大腸菌群分布較廣,在溫血?jiǎng)游锛S便和自然界廣泛存在。調(diào)查研究表明,大腸菌群細(xì)菌多存在于溫血?jiǎng)游锛S便、人類經(jīng)常活動(dòng)的場所以及有糞便污染的地方,人、畜糞便對外界環(huán)境的污染是大腸菌群在自然界存在的主要原因。糞便中多以典型大腸桿菌為主,而外界環(huán)境中則以大腸菌群其他型別較多。大腸菌群是作為糞便污染指標(biāo)菌提出來的,主要是以該菌群的檢出情況來表示食品中有否糞便污染。大腸菌群數(shù)的高低,表明了糞便污染的程度,也反映了對人體健康危害性的大小。糞便是人類腸道排泄物,其中有健康人糞便,也有腸道患者或帶菌者的糞便,所以糞便內(nèi)除一般正常細(xì)菌外,同時(shí)也會(huì)有一些腸道致病菌存在(如沙門氏菌、志賀氏菌等),因而食品中有糞便污染,則可以推測該食品中存在著腸道致病菌污染的可能性,潛伏著食物中du和流行病的威脅,必須看作對人體健康具有潛在的危險(xiǎn)性。
水中糞大腸菌群的常見檢測方法
1、紙片法
采用紙片、紙膜、膠片等作為培養(yǎng)基載體,將特定的培養(yǎng)基和顯色物質(zhì)附著在上面,通過糞大腸菌群在上面的生長、顯色來測定的方法,即糞大腸菌在紙片培養(yǎng)基上呈紅色菌落,菌落周圍產(chǎn)生黃圈是糞大腸菌分解乳糖產(chǎn)酸使指示劑變色的結(jié)果。
2、酶底物法
將加入酶底物檢測試劑的100ml水樣注入51孔或97孔的定量測量盤中進(jìn)行密封后培養(yǎng),由于大腸菌群細(xì)菌能產(chǎn)生一種β-半乳糖苷酶分解PG使得培養(yǎng)液呈黃色,同時(shí)大腸埃希氏菌可以產(chǎn)生葡萄糖醛酸酶分解MUG,培養(yǎng)液將會(huì)在波長366nm紫外光下產(chǎn)生熒光反應(yīng)。通過計(jì)算有黃色反應(yīng)和熒光反應(yīng)的孔穴數(shù),可對照MPN表查出其代表的糞大腸菌群可能數(shù)水中糞大腸菌群。
酶底物法測定總大腸菌群的影響因素
培養(yǎng)溫度
總大腸菌群和大腸埃希氏菌的檢測培養(yǎng)溫度需嚴(yán)格控制在35~37℃,培養(yǎng)溫度過高或過低均使檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。
培養(yǎng)時(shí)間
總大腸菌群培養(yǎng)16~20 h 的檢測結(jié)果與24 h相比均有顯著性差異( p<0.05),培養(yǎng)22、28 與 24 h 結(jié)果差異不顯著( p>0.05);而大腸埃希氏菌培養(yǎng) 16 ~22 h 的檢測結(jié)果與 24 h 相比均有顯著性差異( p<0.05),培養(yǎng)28 h與24 h結(jié)果無顯著性差異( p>0.05)。此方法對總大腸菌群的檢測培養(yǎng)時(shí)間在 22~28h之間可以得到準(zhǔn)確結(jié)果,而大腸埃希氏菌的檢測則需24~28h;無論振蕩培養(yǎng)或者靜置培養(yǎng)對培養(yǎng)結(jié)果基本沒有影響。