PCR儀

簡單的說，PCR就是利用DNA聚合酶對(duì)特定基因做體外或試管內(nèi)In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進(jìn)行專一性的連鎖拷貝。目前常用的技術(shù)，可以將一段基因拷貝為原來的一百億至一千億倍。根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測的標(biāo)準(zhǔn)，可以將PCR儀分為普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR儀，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀四類。

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PCR儀的改進(jìn)與完善

Mullis起初使用的DNA聚合酶是 DNA 聚合酶 I 的Klenow片段，1988年初，Keohanog改用T4 DNA聚合酶進(jìn)行PCR，其擴(kuò)增的DNA片段很均一，真實(shí)性也較高，只有所期望的一種DNA片段。但每循環(huán)一次，仍需加入新酶。1988年Saiki 等從溫泉中分離的一株水生嗜thermus aquaticus 中提取到一種耐熱DNA聚合酶。 

此酶具有以下特點(diǎn)：

①耐高溫，在70℃下反應(yīng)2h后其殘留活性大于原來的90%，在93℃下反應(yīng)2h后其殘留活性是原來的60%，在95℃下反應(yīng)2h后其殘留活性是原來的40%。

②在熱變性時(shí)不會(huì)被鈍化，不必在每次擴(kuò)增反應(yīng)后再加新酶。

③大大提高了擴(kuò)增片段特異性和擴(kuò)增效率，增加了擴(kuò)增長度2.0Kb。由于提高了擴(kuò)增的特異性和效率，因而其靈敏性也大大提高。為與大腸多聚酶IKlenow片段區(qū)別，將此酶命名為TaqDNA多聚酶Taq DNAPolymerase。此酶的發(fā)現(xiàn)使PCR廣泛的被應(yīng)用。

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PCR儀的分類

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀

在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增加一個(gè)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)，就成了熒光定量PCR儀。其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR儀擴(kuò)增原理相同，只是PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記，使用引物和熒光探針同時(shí)與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)連接輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)得出量化的實(shí)時(shí)結(jié)果輸出。把這PCR儀叫做實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(qPCR儀)。熒光定量PCR儀有單通道，雙通道，和多通道。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時(shí)候，選用單通道，有多熒光標(biāo)記的時(shí)候用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標(biāo)記的目的基因表達(dá)產(chǎn)物，因?yàn)橐淮沃荒軝z測一種目的基因的擴(kuò)增量，需多次擴(kuò)增才能檢測完不同的目的基因片段的量。該儀器主要用于醫(yī)學(xué)臨床檢測，生物醫(yī)研發(fā)，食品行業(yè)，科研院校等機(jī)構(gòu)。

PCR儀產(chǎn)品特點(diǎn)

優(yōu)化的溫控模式，升降溫速度快，溫控準(zhǔn)確，熱，儀器壽命更長。一機(jī)多用：兼容0.2ml，0.5ml管，96標(biāo)準(zhǔn)微孔板。無油熱蓋調(diào)節(jié)方便，徹底防止蒸發(fā)。儀器操作簡便，人機(jī)界面友好。體積小，重量輕，節(jié)省實(shí)驗(yàn)室空間。