生物有機(jī)肥產(chǎn)品生產(chǎn)菌種安全性分析

雖然目前生物有機(jī)肥產(chǎn)品生產(chǎn)菌種大多采用植物根際促生菌， 但近年來(lái)很多研究發(fā)現(xiàn)，芽孢菌屬和類芽孢菌個(gè)別菌株能產(chǎn)生菌素。 即便在菌種安全分級(jí)目錄中列為一級(jí)免做理學(xué)試驗(yàn)的菌種， 如枯草芽孢菌、 多類芽孢菌、 地衣芽孢菌等個(gè)別菌株也檢測(cè)到部分溶血素基因， 潛在危害不容忽視。 因此， 開(kāi)展生物有機(jī)肥產(chǎn)品生產(chǎn)菌種生物安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)， 從源頭上把好菌種安全關(guān)是產(chǎn)品質(zhì)量安全的首要保障。通過(guò)調(diào)研發(fā)現(xiàn)， 用于生物有機(jī)肥產(chǎn)品的部分生產(chǎn)菌種分類地位不明確， 甚至混亂， 難以從源頭上進(jìn)行安全風(fēng)險(xiǎn)的初步識(shí)別 。 以常見(jiàn)生產(chǎn)菌種枯草芽孢菌為例， 實(shí)際上是一個(gè)表型相似的群體， 包括枯草芽孢菌、 地衣芽孢菌、 短小芽孢菌、解淀粉芽孢菌、 深褐 （萎縮） 芽孢菌、莫哈韋（莫杰夫） 芽孢菌、 死谷芽孢菌、 索諾拉沙漠芽孢菌、 特基拉芽孢菌、暹羅芽孢菌等 10個(gè)緣種。生產(chǎn)企業(yè)送檢的枯草芽孢菌生物有機(jī)肥產(chǎn)品， 經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)很多產(chǎn)品實(shí)際為解淀粉芽孢菌， 且許多菌株具有很強(qiáng)的溶血作用。通過(guò)對(duì)生產(chǎn)企業(yè)調(diào)研發(fā)現(xiàn)， 部分生產(chǎn)企業(yè)選擇分離于動(dòng)物腸道的解淀粉芽孢菌作為產(chǎn)品生產(chǎn)用菌株， 該類菌種生產(chǎn)發(fā)酵周期短、 活菌數(shù)量高、 生產(chǎn)成本低， 但產(chǎn)品的應(yīng)用功效不佳， 溶血風(fēng)險(xiǎn)大 ， 建議慎用。而植物來(lái)源的解淀粉芽孢菌溶血風(fēng)險(xiǎn)小， 產(chǎn)品應(yīng)用效果好， 推薦使用。

                                                            低溫生物菌種的脫水存法

③ 石蠟油封存法，在斜面菌種培養(yǎng)物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。

                                                           低溫生物菌種的控溫方法

1.程序控溫降溫法，應(yīng)用電子計(jì)算機(jī)程序控制降溫裝置，可以穩(wěn)定連續(xù)降溫，能很好地控制降溫速率。

從液氮罐中取出安瓿管或塑料凍存管，應(yīng)立即放置在38℃-40℃水浴中快速?gòu)?fù)蘇并適當(dāng)搖動(dòng)。直到內(nèi)部結(jié)冰全部溶解為止，一般約需50秒-100秒。開(kāi)啟安瓿管或塑料凍存管，將內(nèi)容物移至適宜的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。

低溫生物菌種純化方法

1、傾注平板法

首先把微生物懸液通過(guò)一系列稀釋，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40~50°左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混合，然后把這混合液傾注到無(wú)菌的培養(yǎng)皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養(yǎng)。單一細(xì)胞經(jīng)過(guò)多次增殖后形成一個(gè)菌落，取單個(gè)菌落制成懸液，重復(fù)上述步驟數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)物 2、涂布平板法

首先把微生物懸液通過(guò)適當(dāng)?shù)南♂?，取一定量的稀釋液放在無(wú)菌的已經(jīng)凝固的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，然后用無(wú)菌的玻璃刀把稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上，經(jīng)恒溫培養(yǎng)便可以得到單個(gè)菌落。3、平板劃線法

簡(jiǎn)單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無(wú)菌的接種環(huán)取培養(yǎng)物少許在平板上進(jìn)行劃線。劃線的方法很多，常見(jiàn)的比較容易出現(xiàn)單個(gè)菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、四格法等。當(dāng)接種環(huán)在培養(yǎng)基表面上往后移動(dòng)時(shí)，接種環(huán)上的菌液逐漸稀釋，然后在所劃的線上分散著單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)，每一個(gè)細(xì)胞長(zhǎng)成一個(gè)菌落。

2、富集培養(yǎng)法

富集培養(yǎng)法的方法和原理非常簡(jiǎn)單。我們可以創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長(zhǎng)，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)，在生長(zhǎng)能力方面遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)其他微生物。所創(chuàng)造的條件包括選擇合適的碳源、能源、溫度、光、pH、滲透壓和氫受體等。在相同的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下，經(jīng)過(guò)多次重復(fù)移種，然后富集的菌株很容易在固體培養(yǎng)基上長(zhǎng)出單菌落。如果要分離一些專性寄生菌，就必須把樣品接種到相應(yīng)敏感宿主細(xì)胞群體中，使其大量生長(zhǎng)。通過(guò)多次重復(fù)移種便可以得到純的寄生菌。