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PCR實(shí)驗(yàn)室工作基本原則
不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開各工作區(qū)域時(shí),不得將工作服帶出。
PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)原則
原則上應(yīng)當(dāng)設(shè)置4個(gè)區(qū)域:試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。根據(jù)使用儀器的功能,區(qū)域可適當(dāng)合并。
PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)功能及主要設(shè)備
擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū):擴(kuò)增產(chǎn)物的測定。本區(qū)主要設(shè)備有加樣器和水浴箱等。本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓,以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域。
由于擴(kuò)增產(chǎn)物僅幾百或幾十堿基對(bp),對紫外線損傷不敏感,因此紫外照射擴(kuò)增片段必須延長照射時(shí)間,好是照射過夜。
PCR實(shí)驗(yàn)室裝飾
實(shí)驗(yàn)室圍護(hù)結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固、氣密性好;所有陰陽角宜采用圓弧過渡;墻體內(nèi)壁光潔、不積塵、耐腐蝕、易清洗消毒;地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪,材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。
PCR實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)——標(biāo)本制備區(qū)
由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,可通過在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件,避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。
為避免樣本間的交叉污染,加入待測核酸后,必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對具有潛在危險(xiǎn)性的材料,必須在生物安全柜內(nèi)開蓋,并有明確的樣本處理和滅活程序。
PCR實(shí)驗(yàn)室布局
PCR實(shí)驗(yàn)室原則上為試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域并設(shè)有專用走廊,各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。