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PCR實驗室各區(qū)功能及主要設備
樣品制備區(qū):主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區(qū)主要設備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。
PCR實驗室裝飾
實驗室圍護結構應牢固、氣密性好;所有陰陽角宜采用圓弧過渡;墻體內壁光潔、不積塵、耐腐蝕、易清洗消毒;地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪,材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。
PCR實驗室布局
實驗室的氣流也應從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),不得逆向流動。各工作區(qū)頂部應安裝紫外燈,紫外燈的波長為254nm,每20㎡一支40W的紫外燈。
PCR實驗室工作基本原則
由于紫外照射的距離和能量對去污染的效果非常關鍵,因此可使用可移動紫外燈(254nm波長),在工作完成后調至實驗臺上60~90cm內照射。
PCR實驗室又叫基因擴增實驗,PCR是聚合酶鏈式反應簡稱。是一種分子生物學技術,用于放大特定的DNA,可看作生物體外的特殊DNA。通過DNA基因追系統(tǒng),能迅速掌握生物體內的病毒含量,其精準度高達納米級別。
PCR實驗室注意事項
幾個區(qū)域的大小設置情況,試劑準備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產物分析區(qū),空間可以相對小一些,樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱,空間應大一些。
PCR實驗室是分子診斷的基礎,也是進行PCR實驗的必備場所。近些年,分子診斷行業(yè)快速發(fā)展,對PCR的認識又進入到了一個新的階段,但是基于實驗室的基本知識仍然是非常重要的一環(huán)。
PCR實驗室工作基本原則
不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開各工作區(qū)域時,不得將工作服帶出。
PCR實驗室布局
實驗室的氣流也應從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),不得逆向流動。各工作區(qū)頂部應安裝紫外燈,紫外燈的波長為254nm,每20㎡一支40W的紫外燈。
PCR實驗室注意事項——擴增產物分析區(qū)
本區(qū)是主要的擴增產物污染來源,因此必須注意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴增產物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測擴增產物時,必須使用洗板,廢液必須收集至1 mol/L HCl中,并且不能在實驗室內傾倒,而應當至遠離PCR實驗室的地方棄掉。
PCR實驗室注意事項——標本制備區(qū)
由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,可通過在本區(qū)內設立正壓條件,避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。
工作結束后,必須立即對工作區(qū)進行清潔。工作區(qū)的實驗臺表面應當可耐受諸如化學物質的消毒清潔作用。實驗臺表面的紫外照射應當方便有效。