農(nóng)bacillus轉(zhuǎn)化法

　　農(nóng)bacillus包括引起植物冠癭瘤的根癌農(nóng)bacillus和引起發(fā)根病的發(fā)根農(nóng)桿1菌。根癌農(nóng)桿1菌和發(fā)根農(nóng)bacillus有相似的遺傳背景。在農(nóng)bacillus介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化中，80%左右是由根癌農(nóng)bacillus介導(dǎo)的，大約20%是由發(fā)根農(nóng)bacillus介導(dǎo)的。這里主要介紹根癌農(nóng)桿1菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化。

　　根癌農(nóng)bacillusTi質(zhì)粒上有一段轉(zhuǎn)移DNA（T-DNA）和Vir區(qū)，在農(nóng)bacillus侵染植物時(shí)，這段T-DNA可以插入到植物基因組中，使其攜帶的基因在植物中得以表達(dá)。Vir區(qū)共24個(gè)基因，它們表達(dá)的蛋白與T-DNA的加工和轉(zhuǎn)移有關(guān)。

　　農(nóng)桿1菌轉(zhuǎn)化法在植物遺傳轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用：過去認(rèn)為受農(nóng)bacillus宿主范圍限制，農(nóng)bacillus介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化只限于雙子葉植物。1987年Grimsly首先將玉米條斑病毒的cDNA克1隆至質(zhì)粒上，用農(nóng)bacillus侵染的方法將玉米條斑病毒的cDNA導(dǎo)入玉米，使植株表現(xiàn)了系統(tǒng)感1染癥狀。這個(gè)報(bào)道有力地證明了農(nóng)bacillus能夠侵染玉米這種單子葉植物。隨著載體系統(tǒng)和轉(zhuǎn)化方法的改進(jìn)，農(nóng)bacillus介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化不再局限于雙子葉植物，在一些單子葉植物如水稻、玉米和小麥等重要的農(nóng)作物上也相繼獲得成功。

　　進(jìn)入20世紀(jì)90年代后，農(nóng)桿1菌轉(zhuǎn)化法在水稻、玉米等重要的農(nóng)作物上取得突破性進(jìn)展。首先是1991年Gould和Shen等利用農(nóng)bacillus轉(zhuǎn)化玉米莖尖分生組織獲得轉(zhuǎn)基因植株。1998年Lupotto也實(shí)現(xiàn)了農(nóng)bacillus轉(zhuǎn)化玉米的成功，Southern雜交結(jié)果顯示外源基因能夠穩(wěn)定遺傳到下一代。

腺病毒是無胞膜的線性雙鏈DNA病毒，目前腺病毒科分為5個(gè)屬，有多種型別的腺病毒已經(jīng)被開發(fā)為基因轉(zhuǎn)移載體，在基礎(chǔ)科研、基因cure和載體疫1苗領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。

腺病毒的基因組長約26-46kb，這使得腺病毒載體的構(gòu)建與常見質(zhì)粒載體(一般長度小于10kb)不同。太長的基因組使得在腺病毒載體上富集一個(gè)多克1隆位點(diǎn)非常困難。針對重組腺病毒的構(gòu)建，開發(fā)了多種方法。

目前已有的腺病毒載體系統(tǒng)均存在缺陷，有些構(gòu)建步驟繁瑣，耗時(shí)較長，有些在重組病毒中引入了不必要的外源序列，有些不能用于重組腺病毒的反向遺傳改造。近年來，新的生物特性不同的腺病毒不斷被發(fā)現(xiàn)，因此，本領(lǐng)域?qū)?gòu)建過程更加快捷簡便的、人工改造更加方便靈活的腺病毒載體系統(tǒng)和重組病毒構(gòu)建方法存在需求。

腺病毒防治原則

腺病毒的甲醛滅活疫1苗已被用于某些人群的預(yù)防，而且將來有被用人二倍體細(xì)胞培養(yǎng)的減毒活疫1苗所替代的可能。但因腺病毒對動(dòng)物具有致癌作用，人們對全病毒疫1苗的作用與安全性存有疑慮。此外加強(qiáng)游泳池和浴池水的消毒，可使水傳播性結(jié)膜1炎爆發(fā)的危險(xiǎn)性降至zui小，在作眼的檢查時(shí)應(yīng)嚴(yán)格無菌操作，對所用設(shè)備充分滅菌，也可控制流行性結(jié)膜1炎的發(fā)生。對腺病毒感1染的cure仍無有效medicine。