營養(yǎng)條件

1．培養(yǎng)基細胞培養(yǎng)基包含細胞生長所需的各種營養(yǎng)物質(zhì)，包括碳水化合物、氨基酸、無機鹽、維生素等。針對不同細胞的營養(yǎng)需求，有多種合成培養(yǎng)基可供選擇，如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。

2．其他添加成分在各種合成培養(yǎng)基提供基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)之外，還需根據(jù)不同細胞和不同的培養(yǎng)目的添加其他成分，如血1清、因子等。

血1清提供的是細胞外基質(zhì)、生長因子和轉(zhuǎn)鐵蛋白等重要物質(zhì)，常用的是胎牛血1清。要根據(jù)不同的細胞和不同的研究目的決定添加血1清的比例。10%～20%的血1清能維持細胞較快的生長增殖速度，稱為生長培養(yǎng)液；為維持細胞緩慢生長或不死，添加2%～5%的血1清即可，稱為維持培養(yǎng)液。但血1清中也存在有害于細胞生長和繁殖的物質(zhì)，如補體、免1疫球蛋白和一些生長抑制因子；成分不明確，影響對結(jié)果的分析；不同動物、不同批次的血1清活性差別較大，影響培養(yǎng)效果的穩(wěn)定性。

谷氨酰胺是細胞生長重要的氮源，在細胞生長代謝過程中起重要作用，但由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定容易降解，4℃下放置7天即可分解約50%，故谷氨酰胺需在使用前添加。

細胞傳代

細胞密度達到80%~90%時．去培養(yǎng)基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25?TA的胰蛋白酶，放人細胞培養(yǎng)箱3min。加人1ml DMEM完全培養(yǎng)基終止胰酶消化，轉(zhuǎn)移至15ml離心管。

加入10ml PBS清洗細胞培養(yǎng)盤，轉(zhuǎn)移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10ml PBS（經(jīng)高壓滅菌，保存于40C），吹勻，吸取10微升進行計數(shù)，按照1×106/盤接種，在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

細胞的多能性受到轉(zhuǎn)錄因子網(wǎng)絡(luò)和表觀遺傳學的復雜調(diào)控，那么，僅僅依靠導人的幾個轉(zhuǎn)錄因子是如何完成這一復雜的任務(wù)，從而誘導出具有多能性的細胞呢?深入研究體細胞重編程的分子機制，調(diào)控機制以及體外定向誘導分化機制也是未來研究的重要任務(wù)之一。

1，逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體導致tumour發(fā)生的潛在風險需要加以有效防范。

2，需要深入研究比較iPS細胞和hES細胞在細胞生物學的特性、 定向分化機制等方面是否具有顯著的差異。

3，需建立一種新的方法以避免基因轉(zhuǎn)染或基因轉(zhuǎn)導帶來的潛在風險, 如通過某些化學物品或因子喚醒體細胞中固有的上述轉(zhuǎn)錄因子的方式以替換外源性基因轉(zhuǎn)染的方式, 或者用某些因子的短暫性表達代替永1久性導入。