ELISA定量測定

ELISA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時(shí)常用半對數(shù)值，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是相對理想的檢測區(qū)域。

測定小分子量物質(zhì)常用競爭法，其標(biāo)準(zhǔn)曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負(fù)相關(guān)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線注意圖中橫坐標(biāo)為對數(shù)關(guān)系，這更有利于測定系統(tǒng)的表達(dá)。

EXBio的T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)檢測試劑盒（T-cell BlastoFlowEx Kit）#ED7642 旨在測量活化的全血樣本中T淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)。 該試劑盒使用抗CD3和抗Ki67抗1體混合物檢測增殖的淋巴細(xì)胞。

T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)流程：

1.從培養(yǎng)箱中取出試管，取下并丟棄管蓋。每管中加入25 ul EDTA溶液，混合。

2.在37℃下孵育10分鐘。

3.加入2ml的PBS，混合。400g離心細(xì)胞5分鐘，移除上清液。

4.輕輕搖動(dòng)管子擾亂沉淀。加入2ml的稀釋固定和裂解溶液，混合。室溫下孵育10分鐘。

5.400g離心細(xì)胞5分鐘，移除上清液。

6.加入0.5ml稀釋的破膜溶液，混合。室溫下孵育10分鐘。

7.加入2ml的PBS。400g離心細(xì)胞5分鐘，移除上清液。

8.加入50 ul的CD3/Ki-67 PE抗1體預(yù)混液，混勻，室溫下孵育至少30分鐘。

9.加入2ml PBS。400g離心細(xì)胞5分鐘，移除上清液。

10.用0.1-0.3ml的1％甲醛PBS溶液或者稀釋的固定和裂解液（1份固定裂解液液 9份PBS的緩沖液）重懸細(xì)胞。在2-8℃下暗室條件下儲存處理后的樣品，直到分析。

RNA病毒檢測試劑盒用于定性檢測和分析RNA病毒和RNA分子，特別適合檢測病毒等此類病毒。

組分1. ConviFlex? RT-Taq Mix的凍干粉包含：MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq聚合酶及dNTP。

其中MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶，來自小鼠白血1病病毒（M-MuLV）并經(jīng)過基因修飾。

這里的Taq聚合酶另兼具熱啟動(dòng)功能。

此Taq酶在室溫下，活性被抗1體所抑制，當(dāng)溫度達(dá)到70°C以上時(shí)，才會(huì)被完全激1活。

在70°C 以下時(shí)，由于Taq酶沒有完全活化，因此實(shí)驗(yàn)不會(huì)產(chǎn)生非特異性PCR產(chǎn)物和引物二聚體。熱啟動(dòng)Taq酶的使用可使PCR具有更高的特異性和靈敏度。

信使RNA（mRNA）早先發(fā)現(xiàn)于1960年，在蛋白質(zhì)合成過程中負(fù)責(zé)傳遞遺傳信息、直接指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成，具有以下特點(diǎn)。 

1.含量低，占細(xì)胞總RNA的1%~5%。

2.種類多，可達(dá)105種。不同基因表達(dá)不同的mRNA。

 3.壽命短，不同mRNA指導(dǎo)合成不同的蛋白質(zhì)，完成使命后即被降解。細(xì)菌mRNA的平均半衰期約為1.5分鐘。脊椎動(dòng)物mRNA的半衰期差異極大，平均約為3小時(shí)。

4.長度差異大哺乳動(dòng)物mRNA長度為5×102~1×105nt原核生物與真核生物的mRNA雖然在結(jié)構(gòu)上有差異，但功能一樣，都是指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成的模板。