ELISA定量測定

ELISA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線zui高點的吸光度可接近2.0，繪制時常用半對數(shù)值，以檢測物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是相對理想的檢測區(qū)域。

測定小分子量物質(zhì)常用競爭法，其標(biāo)準(zhǔn)曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負相關(guān)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線注意圖中橫坐標(biāo)為對數(shù)關(guān)系，這更有利于測定系統(tǒng)的表達。

五種生化試劑盒的研究意義

多酚氧化酶（PPO）（EC1.10.3.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，屬于一種氧化酶，通常在銅離子存在下，能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌，從而引起褐化，與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關(guān)。

鉀離子對于維持機體的正常滲透壓及酸堿平衡有非常重要的作用，參與糖及蛋白代謝，保證神經(jīng)肌肉的正常功能。血1清鉀高于5.5 mmol/L時稱高血鉀，高血鉀可使神經(jīng)、肌肉應(yīng)激性升高，使心肌應(yīng)激性降低，導(dǎo)致心動過緩，血1清鉀超過10 mmol/L時，可發(fā)生心室纖顫，甚至心臟在舒張期停跳。血1清鉀低于3.5 mmol/L時稱低血鉀，低血鉀可引起肌無力甚至肌肉弛緩性麻1痹，引起心肌應(yīng)激性升高，出現(xiàn)心動過速、心律紊亂甚至在收縮期停跳。因此，血1清鉀是常用生化測定指標(biāo)。

脂肪代謝是機體內(nèi)非常重要的代謝途徑之一，其在細胞內(nèi)的存儲和利用對于維持細胞正常的能量代謝非常關(guān)鍵，且在細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的維持上發(fā)揮著不可忽視的作用。越來越多的研究顯示脂肪代謝與core的發(fā)展有著一定的關(guān)系；細胞異常增殖是所有bad core細胞的一個常見特性，在細胞異常增殖的過程中細胞膜和信號分子的形成需要更多的脂肪代謝中脂肪酸代謝和脂滴代謝的參與。

從動物組織中提取基因組DNA

使用研缽進行勻漿時：

① 取1～100 mg的動物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的研缽中，快速用力展研成勻漿。注）下列組織請加液氮研磨至粉末狀。

A．富含DNA酶的胰臟、脾1臟、胸腺、淋巴等組織。

B．富含膠原蛋白的皮膚、肌腱等組織。

C．富含角質(zhì)蛋白的組織或堅硬的組織（如骨骼）等。

② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1，溫和研磨30秒鐘。注）使用上述①-注）的實驗材料時，請在加入Solution A及RNase A1后，將研缽置于65℃水浴上研磨1分鐘。

③ 收集650 μl研磨好的組織勻漿液移至Collection Tube中。如果勻漿體積不足650 μl，請補充Solution A至650 μl，65℃保溫5分鐘。

使用研磨棒進行勻漿時:

① 取1～100 mg的動物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的Collection Tube 中，用研磨棒快速研磨成糊狀。

② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成勻漿。

③ 加入350 μl的Solution A將研磨棒上的勻漿沖入Collection Tube中，充分振蕩混合后，65℃保溫5分鐘。

tRNA二級結(jié)構(gòu)

約50%堿基配對，形成四段雙螺旋，與五段非配對序列形成三葉草形結(jié)構(gòu)。

該結(jié)構(gòu)中存在四臂四環(huán)：

①氨基酸臂。 

②二氫尿C4H4N2臂（DHU臂、D臂）和二氫尿C4H4N2環(huán)（DHU環(huán)、D環(huán)），特征是含二氫尿C4H4N2（DHU、D）。 

③反密碼子臂和反密碼子環(huán)，特征是反密碼子環(huán)含反密碼子。反密碼子5′端與尿苷酸連接，3′端與piao呤核苷酸連接。TΨC臂（T臂）和TΨC環(huán)（Ψ環(huán)），特征是TΨC環(huán)含胸腺C4H4N2核糖核苷酸T54假尿苷酸Ψ55胞苷酸C56。

④額外環(huán)3~21nt。

tRNA三級結(jié)構(gòu)呈L形，氨基酸結(jié)合位點位于其一端，反密碼子環(huán)位于其另一端，DHU環(huán)和TΨC環(huán)雖然在二級結(jié)構(gòu)中位于兩側(cè)，但在三級結(jié)構(gòu)中卻相鄰。盡管各種tRNA的長度和序列不盡相同，但其三級結(jié)構(gòu)相似，提示三級結(jié)構(gòu)與其功能密切相關(guān)。