選擇素elisa試劑盒的實驗原理

選擇素elisa試劑盒是一類異親型結合、Ca2 依賴的細胞粘著分子，能與特異糖基識別并結合。主要參與白細胞與血管內(nèi)皮細胞之間的識別與粘著。

實驗原理：

將目標包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入品或標本，其中的目標連接于固相載體上的結合，然后加入微生物化的目標，將未結合的生物素洗凈后，加入HRP標記和親和素，再次徹底洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的。顏色的深淺和樣品中的目標呈正相關。用酶1標儀在450nm波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。

精密度：精密度用樣品測定值的變異系數(shù)CV表示。CV（%）=SD/mean×100

批內(nèi)差：取同批次選擇素elisa試劑盒對低、中、高值定值樣本進行定量檢測，每份樣本連續(xù)測定20次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值。

批間差：選取3個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本定量測定，每個樣本使用同一試劑盒重復測定8次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD值。

批內(nèi)差： CV<10% Inter-批間差： CV<13%

經(jīng)測定，試劑盒在X期內(nèi)按推薦溫度保存，其活性率小于5%。為減小外部因素對試劑盒前后檢測值的影響，實驗室的條件需盡量保持一致，尤其是實驗室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進行操作可人為誤差。

選擇素elisa試劑盒識別的配體都是一些寡糖基團，迄今為止發(fā)現(xiàn)的配體都是一些具有唾液酸化路易斯寡糖(s-Le，siaglyl-Lewis)或類似結構的分子。一種寡糖基團可以存在多種糖蛋白和糖脂分子上，并分布于多種細胞表面，因此選擇素分子配體在體內(nèi)分布較為廣泛。

隨著基因組測序、分子生物學檢測手段的快速發(fā)展，PCR和熒光定量PCR實驗，正在越來越多的實驗室應用。然而，PCR作為一種高靈敏度的檢測手段，PCR的實驗結果也容易被各種無關的外源性DNA或RNA所干擾。

PCR實驗室中，很容易發(fā)生DNA的交叉污染，污染通常來自于離心管、移液器和其他試驗設備產(chǎn)生的DNA氣溶膠，或DNA溶液污染桌面，或吸樣槍不慎將樣品或模板核酸吸入槍內(nèi)。據(jù)估算，一個氣溶膠顆?？珊?8000個DNA拷貝。 因此，為保證PCR試驗的數(shù)據(jù)準確，避免交叉污染，應定期對PCR實驗室做DNA污染情況的監(jiān)測。

RNA病毒檢測試劑盒產(chǎn)品特點：

1. 凍干粉為逆轉錄酶和Taq酶的預混液，將RNA逆轉錄與qPCR擴增兩個過程合并，一步完成，減少移液次數(shù)、避免交叉污染、操作簡單，節(jié)約時間。

2. Taq酶具有70°C熱啟動功能，顯著提高試劑盒的特異性和敏感度。

3. 主要組分為凍干粉，4℃保存，儲存運輸方便，性能穩(wěn)定。

武漢友名生物(U-MeBiotech)技術有限公司成立于2009年5月18日。公司致力于為廣大科研工作者提供品質(zhì)的生命科學產(chǎn)品和專業(yè)、有效的技術服務。公司對所有崗位員工都經(jīng)過了嚴格的培訓，對所銷售的產(chǎn)品及其使用都比較熟悉。同時，在公司內(nèi)部定期開展自我提高學習培訓，由各崗位員工對所銷售的產(chǎn)品進行系統(tǒng)培訓學習，并進行嚴格的考核。這都為公司的專業(yè)化服務提供了有力保障！公司目前主要從事分子生物學，蛋白質(zhì)研究、細胞學研究，NGS等相關產(chǎn)品的銷售及技術服務，同時也開展生物化學原料的合成，實驗技術服務。

總RNA的抽提方法:

目前常用的方法是用異硫qing酸胍苯1酚抽提法。

提取步驟:

先用液氮研磨材料，勻漿，加入Trizol試劑，進一步破碎細胞并溶解細胞成分。然后加入氯1仿抽提，離心，分離水相和有機相，收集含有RNA的水相，通過異丙1醇沉淀，獲得比較純的總RNA,用于下一步mRNA的純化。也可將含有RNA樣品的細胞破碎液通過硅膠膜純化柱純化。

RNA濃度和純度判斷:

OD260為1時相當于濃度為50 ug/mL;

OD260/0D280值在1.8~ 2.0之間，表示純度較好;

0D260/OD280值低于1.8，樣品有蛋白質(zhì)或酚污染;

0D260/0D280值大于2.0，提取的RNA可能有降解;

電泳后如果rRNA大小完整，而且28S rRNA和18SrRNA亮度接近2:1、mRNA分布均勻，則認為RNA。