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蛋白質(zhì)分子伴侶(molecular chaperones)是蛋白質(zhì)合成過程中形成空間結(jié)構(gòu)的控制因子,廣泛存在于從細(xì)菌到人的細(xì)胞中。分子伴侶新生肽鏈的折、加工租穿膜進(jìn)大細(xì)胞器的轉(zhuǎn)位過程中起關(guān)鍵作用。它們有些結(jié)合在多肽鏈上防止肽鏈降解或其側(cè)鏈非特異聚集;有些則可引導(dǎo)某些肽鏈正確折疊并集合多條肽鏈成為較大的結(jié)構(gòu)。
分子伴侶結(jié)合并穩(wěn)定其靶蛋白質(zhì)的能力具有特異性,并依賴于ATP水解。例如熱激蛋白(heat shock protein)就是分子伴侶的一個(gè)家族。因加熱時(shí)可在許多細(xì)胞中被誘導(dǎo)出來而得名。熱激蛋白源于細(xì)胞內(nèi)源性保護(hù)蛋白質(zhì)。另外,分子伴侶還可以是核酸、磷脂、核糖體及一些小分子物質(zhì)。
植物表達(dá)系統(tǒng)
植物能夠表達(dá)來自動物、細(xì)菌、病毒以及植物本身的蛋白質(zhì)易于大規(guī)模培養(yǎng)和生產(chǎn),且在基因表達(dá)與修飾及安全性方面有特別的優(yōu)勢,因此利用植物生產(chǎn)外源蛋白質(zhì)的研究展現(xiàn)了極其誘人的前景。多種抗1體、酶、激紊、血漿蛋白等都已通過基因工程的手段在植物的葉、莖、根、果實(shí)、種子以及植物細(xì)胞和器1官中得到表達(dá),然而提取與純化始終是大規(guī)模利用植物生產(chǎn)重組蛋白的主要障礙。Doloressa等據(jù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)信號肽在蛋白質(zhì)合成中的作用,把3種重組蛋白,即嗜熱細(xì)菌來源的木聚糖酶、水母的綠色熒光蛋白和Human placenta分泌的堿性磷酸酶(SEAP)定位到質(zhì)外體中,通過根分泌和葉分泌途徑獲得表達(dá),從而建立了兩種新的重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)——植物根分泌和葉分泌,簡化了分離和純化程序,為利用轉(zhuǎn)基yin植物大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白提供了潛在的途徑。雖然利用植物表達(dá)、生產(chǎn)外源性蛋白起步較晚,但已經(jīng)能夠利用植物生產(chǎn)多種食用以及工業(yè)用蛋白及酶制劑。
蛋白質(zhì)測定試劑
(1)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液:用標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)晶牛血1清清蛋白(bsa)或標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白,配制成10mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液,可用bsa濃度1mg/ml的a280為0.66來校正其純度。如有需要,標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)還可預(yù)先用微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量,計(jì)算出其純度,再根據(jù)其純度,稱量配制成標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。牛血1清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制,酪蛋白用0.05NaOH配制。
(2)雙縮脲試劑:稱以1.50克硫酸銅(CuSO4?5H2O)和6.0克酒石酸鉀鈉(KNaC4H4O6?4H2O),用500毫升水溶解,在攪拌下加入300毫升10% NaOH溶液,用水稀釋到1升,貯存于塑料瓶中(或內(nèi)壁涂以石蠟的瓶中)。此試劑可長期保存。若貯存瓶中有黑色沉淀出現(xiàn),則需要重新配制。