基于基因工程技術(shù)制備小分子特異性antibody

通過大量的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小分子的偶聯(lián)物并不是不能產(chǎn)生特異性針對(duì)小分子的抗1體，而是效價(jià)過低，不滿足制備多克1隆抗1體和單克1隆抗1體的需要，但是基因工程手段為制備該類型小分子特異性antibody提供了新的思路。該技術(shù)的核心在于制備antibody的基因文庫，通過噬菌體展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)等獲取antibody的目的基因，再利用蛋白表達(dá)系統(tǒng)制備重組antibody或者改造antibody，以獲取針對(duì)小分子的特異性antibody。目前隨著antibody基因測(cè)序信息的公布和完善，為人工設(shè)計(jì)antibody提供了基礎(chǔ)，這也會(huì)以后小分子特異性antibody的制備提供了新的途徑。

核糖核酸（縮寫為RNA，即Ribonucleic Acid），存在于生物細(xì)胞以及部分病毒、類病毒中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長(zhǎng)鏈狀分子。一個(gè)核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和堿基構(gòu)成。RNA的堿基主要有4種，即A（腺piao呤）、G（鳥piao呤）、C（胞C4H4N2)、U(尿C4H4N2)，其中，U（尿C4H4N2）取代了DNA中的T。核糖核酸在體內(nèi)的作用主要是引導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成。

人體一個(gè)細(xì)胞含RNA約10pg（含DNA約7pg）。與DNA相比，RNA種類繁多，分子量較小，含量變化大。RNA可根據(jù)結(jié)構(gòu)和功能的不同分為信使RNA和非編碼RNA。非編碼RNA分為非編碼大RNA和非編碼小RNA。非編碼大RNA包括核糖體RNA、長(zhǎng)鏈非編碼RNA。非編碼小RNA包括轉(zhuǎn)移RNA、核酶、小分子RNA等。小分子RNA（20~300nt）包括 miRNA、 SiRNA、 piRNA、scRNA、 snRNA、 snoRNA等，細(xì)菌也有小分子RNA（50~500nt）。

提取DNA常用的方法

　　一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細(xì)胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb

　　二.甲酰胺解聚法：破碎細(xì)胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。

　　三.玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細(xì)胞，將裂解物鋪于乙醇上，然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DNA沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。

　　四.異丙1醇沉淀法：基本同1法，僅用二倍容積異丙1醇替代乙醇，可去除小分子RNA(在異丙1醇中可溶狀態(tài))

　　五.表面活性劑快速制備法：用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細(xì)胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。

　　六.加熱法快速制備：加熱96℃-100℃，五分鐘，然后離心后取上清，可用于PCR反應(yīng)。

　　七.堿變性快速制備：先用NaOH作用20分鐘，再加HCI中和，離心后取上清，含少量DNA。

鼻咽拭子的采集

被采集人員需要 保持頭部不動(dòng)，采樣人員去除鼻腔內(nèi)壁的分泌物。然后采樣人員一手輕扶被采集人員頭部，一手將鼻咽拭子緩緩插入鼻腔至鼻咽部。在鼻咽部，拭子將停留數(shù)秒吸取分泌物，而后采樣人員輕輕旋轉(zhuǎn)取出拭子，將樣本保存并送檢。

咽拭子的采集

被采集人員先用 生理鹽水漱口，采樣人員將拭子放入無菌生理鹽水中濕潤(rùn)。被采集人員頭部微仰并保持不動(dòng)，嘴張大，并發(fā)“啊”音，露出兩側(cè)咽扁桃體，采集人員將拭子越過舌根，在被采集者兩側(cè)咽扁桃體稍微用力來回擦拭至少3次，然后再在咽后壁上下擦拭至少3次。

需要注意的是，兩種采集方法， 被采集人員均會(huì)稍感不適，所以在采樣的過程中，被采集人員需稍稍克服一下不適感， 配合采樣人員的工作。不可過度活動(dòng)頭部，以免拭子劃傷粘膜。如被采集人員發(fā)生刺激性咳嗽，采集過程需稍作暫停。