【從植物材料或植物培養(yǎng)細胞中提取基因組DNA】

① 按下表稱取適量的新鮮植物材料（如選用的是冷凍干燥植物材料，則用量減半），剪成小塊放入研缽中，加入液氮，待樣品冷凍完全后快速、用力研磨至粉末狀。研磨時應(yīng)間斷加入液氮以防止材料融化。

植物材料使用量 植物花、葉片10～100 mg 植物莖60～240 mg 植物根80～240 mg 植物種子80～240 mg   如選取植物的根、種子等樣品時，因其基因組DNA含量很低，需使用超過表格中所示的參數(shù)用量，此時請分兩管進行步驟1～6的實驗操作，在步驟7的操作中再將各管溶液分次加入至同一Spin Column中過濾，使各管的基因組DNA結(jié)合到同一個Spin Column上。如從培養(yǎng)的植物細胞中提取基因組DNA，請離心收集2×103～1×107的培養(yǎng)植物細胞，加入150 μl水充分懸浮細胞后移入研缽中，加入液氮后快速、用力研磨至粉末狀。

注）樣品研磨應(yīng)充分，否則將會嚴重影響基因組DNA的收率。

② 將研缽移至65℃水浴，當(dāng)樣品粉末剛開始融化時，向研缽中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1，用力碾磨30秒。

③ 收集650 μl研磨好的組織勻漿移至Collection Tube中。如勻漿體積不足650 μl，請補充Solution A至650 μl。65℃保溫15分鐘。注）處理富含纖維的根/莖等植物材料或富含淀粉、蛋白質(zhì)的種子等時，可延長水浴時間至60分鐘。

核糖核酸（縮寫為RNA，即Ribonucleic Acid），存在于生物細胞以及部分病毒、類病毒中的遺傳信息載體。RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。一個核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和堿基構(gòu)成。RNA的堿基主要有4種，即A（腺piao呤）、G（鳥piao呤）、C（胞C4H4N2)、U(尿C4H4N2)，其中，U（尿C4H4N2）取代了DNA中的T。核糖核酸在體內(nèi)的作用主要是引導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成。

人體一個細胞含RNA約10pg（含DNA約7pg）。與DNA相比，RNA種類繁多，分子量較小，含量變化大。RNA可根據(jù)結(jié)構(gòu)和功能的不同分為信使RNA和非編碼RNA。非編碼RNA分為非編碼大RNA和非編碼小RNA。非編碼大RNA包括核糖體RNA、長鏈非編碼RNA。非編碼小RNA包括轉(zhuǎn)移RNA、核酶、小分子RNA等。小分子RNA（20~300nt）包括 miRNA、 SiRNA、 piRNA、scRNA、 snRNA、 snoRNA等，細菌也有小分子RNA（50~500nt）。

植物ＤＮＡ的ＳＤＳ提取法：1 取2-3ｇ新鮮葉片,在液氮中研磨成粉狀(防止溶化)后轉(zhuǎn)入15ｍｌ離心管中。2 加入5ｍｌ于65℃預(yù)熱的提取緩沖液,65℃水浴保溫30ｍｉｎ(搖動數(shù)次),使提取液與樣品充分混合。3 加入2ｍｌ5ｍｏｌ/ＬＫＡｃ,劇烈振蕩,冰浴保溫20ｍｉｎ以上。4 2700×ｇ離心20ｍｉｎ,將上清液倒入新的15ｍｌ離心管中,(若提?。模危劣糜冢樱铮酰簦瑁澹颍畹葘嶒?一般在轉(zhuǎn)移上清時加濾膜,防止樣品殘渣混入,可保證ＤＮＡ純度)。5 加入4ｍｌ氯1仿/異戊1醇(24∶1),搖勻,平衡,2700×ｇ離心15ｍｉｎ。6 在另一新的15ｍｌ離心管中加入5ｍｌ預(yù)冷的異丙1醇,將上清液用移液槍轉(zhuǎn)入此管,在-20℃冷卻30ｍｉｎ以上。7 2700×ｇ離心10ｍｉｎ,棄去上清液,用4ｍｌ70%乙醇洗滌,室溫保持10ｍｉｎ。2700×ｇ離心3ｍｉｎ,倒去上清液。8 重復(fù)步驟7,用4ｍｌ70%乙醇洗滌,室溫保持10ｍｉｎ。2700×ｇ離心3ｍｉｎ,倒去上清液。超凈工作臺內(nèi)吹干(3ｈ左右)。9 加1ｍｌＴＥ緩沖液中溶解,加10μｌＲＮａｓｅ(10ｍｇ/ｍｌ),在37℃恒溫箱中溫育20ｍｉｎ。10 再加100μｌ3ｍｏｌ/ＬＮａＡｃ和2ｍｌ無水乙醇,2700×ｇ離心3ｍｉｎ,倒去上清液。超凈工作臺內(nèi)吹干(3ｈ左右)。11 將ＤＮＡ沉淀溶于150μｌＴＥ中,置于超凈工作臺內(nèi)(3ｈ左右)。將ＴＥ溶液轉(zhuǎn)入已滅菌的1 5ｍｌｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中,-20℃保存?zhèn)溆谩?