ELISA定性測(cè)定

定性測(cè)定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或antibody作出'有'或'無(wú)'的簡(jiǎn)單回答，分別用'陽(yáng)性'、'陰性'表示。'陽(yáng)性'表示該標(biāo)本在該測(cè)定系統(tǒng)中有反應(yīng)。'陰性'則為無(wú)反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來(lái)表示反應(yīng)的強(qiáng)度，其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測(cè)定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)，呈陽(yáng)性反應(yīng)的zui高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性更具定量意義。

在間接法和夾心法ELISA中，陽(yáng)性孔呈色深于陰性孔。在競(jìng)爭(zhēng)法ELISA中則相反，陰性孔呈色深于陽(yáng)性孔。

在選用支原體PCR法檢測(cè)來(lái)替代藥典方法時(shí)，需要考慮如下兩個(gè)方面：

首先一步是要使用符合歐洲藥典要求，經(jīng)過(guò)全方面驗(yàn)證的支原體檢測(cè)試劑盒，第二部是自我驗(yàn)證，即確認(rèn)所用的樣本基質(zhì)對(duì)于該試劑盒方法是合適的，并且操作過(guò)程是正確的。小規(guī)模的室內(nèi)驗(yàn)證通常需要采用三個(gè)不同批次的試劑盒，然后加入10CFU的標(biāo)準(zhǔn)品，做復(fù)孔（通常是8個(gè)復(fù)孔），并且至少選擇3個(gè)支原體物種進(jìn)行驗(yàn)證。

有的支原體標(biāo)準(zhǔn)品廠(chǎng)家會(huì)提供CFU與基因拷貝數(shù)的比值，以方便二者的換算。因?yàn)?0CFU只能確定PCR能夠達(dá)到的檢測(cè)限在10CFU以下，但無(wú)法具體確定靈敏度的數(shù)值。帶DNA拷貝數(shù)標(biāo)定的基因組DNA標(biāo)準(zhǔn)品則可進(jìn)一步確定檢測(cè)限的數(shù)值。

總之，PCR方法很有用，但需要避免假陰性，驗(yàn)證時(shí)應(yīng)使用陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、無(wú)模板對(duì)照和內(nèi)控對(duì)照，以保證PCR反應(yīng)正常，以及支原體少量存在時(shí)確實(shí)能檢出來(lái)，支原體不存在時(shí)也確保是結(jié)果陰性，從而使得PCR方法在工業(yè)應(yīng)用時(shí)能確保zui終結(jié)果的可靠。

轉(zhuǎn)移RNA

轉(zhuǎn)移RNA（tRNA）在蛋白質(zhì)合成過(guò)程中負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸、解讀mRNA遺傳密碼。tRNA占細(xì)胞總RNA的10%~15%，絕大多數(shù)位于細(xì)胞質(zhì)中。tRNA由Crick于1955年提出其存在，Zamecnik和 Hoagland于1957年鑒定。

tRNA一級(jí)結(jié)構(gòu)具有以下特點(diǎn)：

①是一類(lèi)單鏈小分子RNA，長(zhǎng)73~95nt（共有序列76nt），沉降系數(shù)4S。

②是含稀有堿基zui多的RNA，含7-15個(gè)稀有堿基（占全部堿基的15%~20%），位于非配對(duì)區(qū)。

③5′末端堿基往往是鳥(niǎo)piao呤。

④3'端是CCA序列，其中的腺苷酸常稱(chēng)為A76，其3’—OH是氨基酸結(jié)合位點(diǎn)。