基于基因工程技術(shù)制備小分子特異性antibody

通過大量的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，小分子的偶聯(lián)物并不是不能產(chǎn)生特異性針對小分子的抗1體，而是效價過低，不滿足制備多克1隆抗1體和單克1隆抗1體的需要，但是基因工程手段為制備該類型小分子特異性antibody提供了新的思路。該技術(shù)的核心在于制備antibody的基因文庫，通過噬菌體展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)等獲取antibody的目的基因，再利用蛋白表達(dá)系統(tǒng)制備重組antibody或者改造antibody，以獲取針對小分子的特異性antibody。目前隨著antibody基因測序信息的公布和完善，為人工設(shè)計(jì)antibody提供了基礎(chǔ)，這也會以后小分子特異性antibody的制備提供了新的途徑。

DNA提取過程中各種試劑的作用及原理

溶液III--3mol/L NaAc(pH4.8)溶液：

　　NaAc的水溶液呈堿性，為了調(diào)節(jié)pH至4.8，必須加入大量的冰醋酸。 所以該溶液實(shí)際上是NaAc-HAc的緩沖液。用pH4.8的NaAc溶液是為了把pH12.6的抽提液，調(diào)回pH至中性， 使變性的質(zhì)粒DNA能夠復(fù)性，并能穩(wěn)定存在。而高鹽的3mol/L NaAc有利于變性的大分子染色體DNA、 RNA以及SDS-蛋白復(fù)合物凝聚而沉淀之。前者是因?yàn)橹泻秃怂嵘系碾姾?，減少相斥力而互相聚合.

用乙醇沉淀DNA時為什么一定要加NaAc或NaCl

　　在pH為8左右的溶液中，DNA分子是帶負(fù)電荷的，加一定濃度的NaAc或NaCl，使Na 中和DNA分子上的負(fù)電荷， 減少DNA分子之間的同性電荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀，當(dāng)加入的鹽溶液濃度太低時， 只有部分DNA形成DNA鈉鹽而聚合，這樣就造成DNA沉淀不完全，當(dāng)加入的鹽溶液濃度太高時， 其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于過多的鹽雜質(zhì)存在，影響DNA的酶切等反應(yīng)，必須要進(jìn)行洗滌或重沉淀。

　　加核糖核酸酶降解核糖核酸后，為什么再要用SDS與KAc來處理?

　　加進(jìn)去的RNase本身是一種蛋白質(zhì)，為了純化DNA，又必須去除之，加SDS可使它們成為SDS-蛋白復(fù)合物沉淀，再加KAc使這些復(fù)合物轉(zhuǎn)變?yōu)槿芙舛雀〉拟淃}形式的SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，使沉淀更加完全。也可用飽和酚、*抽提再沉淀，去除RNase。在溶液中，有人以KAc代替NaAc，也可以收到較好效果。

　　在基因操作實(shí)驗(yàn)中，磷酸鹽緩沖系統(tǒng)(pKa=7.2)和硼酸系統(tǒng)(pKa=9.24)等雖然也都符合細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的生理范圍(pH)，可作DNA的保存液，但在轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)時，磷酸根離子的種類及數(shù)量將與Ca2 產(chǎn)生Ca3(PO4)2沉淀，在DNA反應(yīng)時，不同的酶對輔助因子的種類及數(shù)量要求不同，有的要求高離子濃度，有的則要求低鹽濃度，采用Tris-HCl(pKa=8.0)的緩沖系統(tǒng)，由于緩沖液是TrisH /Tris，不存在金屬離子的干擾作用，故在提取或保存DNA時，大都采用Tris-HCl系統(tǒng)，而TE緩沖液中的EDTA更能穩(wěn)定。