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組織研磨儀采用垂直振蕩,使研磨管內(nèi)冷凍的樣品與研磨球型號碰撞,產(chǎn)生的剪切力和撞擊力使組織完全破碎。
組織研磨儀的使用方法如下:1.需將待測的樣品經(jīng)過簡單切碎稱重后,放入50ml離心管中。2.然后加入兩粒15mm研磨珠,在高通量組織研磨儀上以1000 r/min研磨3分鐘,即可得到初步的農(nóng)殘檢測樣品。組織研磨儀功能特點:1、研磨快速,2-4分鐘可對24、56或192個樣品進行快速有效的研磨。3.再經(jīng)過提取液分離、鹽類除水和吸附劑除雜之后,就可以得到清液,用于進一步的檢測分析。
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冷凍研磨儀的特點及應用
·提取核酸/蛋白質(zhì)
低溫研磨樣品能夠有效抑制核酸降解、保留蛋白質(zhì)活性。
·分析藥的成分
藥的有效成分的異構(gòu)體之間常常存在重大區(qū)別。低溫研磨可預防分子因壓力和受熱而降解。
·減少樣品揮發(fā)
低溫研磨能顯著減少樣品的揮發(fā),更完整保留樣品成分含量
·研磨韌性/硬性樣品
對于高韌塑料、高強塑料、樹脂等難研磨樣品,低溫研磨可大大提高研磨效果及效率
以下內(nèi)容是由北京旭鑫盛科有限公司提供,希望對同行業(yè)有所幫助!
每50~100mg 組織加入0.2體積 TRIzol
1.加鋼球1顆,設(shè)置研磨儀參數(shù):12單位振頻,1min,每種樣品基本充分勻漿
2. 將上述勻漿液每0.2體積 TRIzol 試劑用量的勻漿液中加入0.04體積氯方,蓋緊管蓋,手動劇烈震搖15 秒鐘,然后室溫靜置2~3 分鐘。
3. 4℃ 10,000g 離心10 分鐘。
4. 小心吸取上層水相(無色)加入到新試管中,同時計算所吸取的水相體積。不必過多吸取,防止吸入DNA和蛋白雜質(zhì)(中間層,白色)。
5. 加入所吸取水相等體積預冷的異丙淳,蓋緊管蓋,輕輕搖勻。
6. 室溫靜置10 分鐘,待RNA 充分沉淀(為減少RNA 降解,此步驟可省略)。
7. 4℃ 10,000g 離心10 分鐘。
8. 將上清棄除(注意別丟棄沉淀),每管加入0.2體積75%乙醇潤洗,蓋緊管蓋,輕輕晃動試管,以去除殘留的異丙淳和鹽份。4℃ 7,500g 離心5 分鐘。
9. 將上清棄除(注意別丟棄沉淀),打開管蓋,將RNA 沉淀干燥(室溫揮發(fā)或真空干燥)。注意RNA 沉淀不可完全干燥,否則難以溶解。
10. 將RNA 沉淀溶解于適量的無RNase 水中。如果RNA 沉淀溶解不完全,將使OD260/OD280≤1.6。此RNA 溶液可用于進一步實驗,或者-70℃保存。