低溫生物菌種為什么可以在零下保藏？

低溫生物菌種都是需要保護(hù)劑的，動(dòng)物細(xì)胞也可以。細(xì)菌結(jié)構(gòu)問(wèn)題使得它比較容易保存，只用加10%左右的甘油就可以在-20攝氏度保存。動(dòng)物細(xì)胞需要加DMSO等，并且需要放到-80或者液氮才行冷凍保藏是指將菌種于-20℃以下的溫度保藏，通過(guò)冷凍，使微生物代謝活動(dòng)停止。就是通過(guò)低溫來(lái)抑制微生物的生命活動(dòng)，在保藏過(guò)程中，必須使微生物的代謝處于不活躍或相對(duì)靜止的狀態(tài)，才能在一定的時(shí)間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素。

                                                           低溫生物菌種對(duì)沙土有什么要求？

1 沙土管制備
將河沙用60目過(guò)篩，棄去大顆粒及雜質(zhì)，再用80目過(guò)篩，去掉細(xì)沙。用吸鐵石吸去鐵質(zhì)，放入容器中用10%鹽酸浸泡，如河沙中有機(jī)物較多可用20%鹽酸浸泡。24小時(shí)后倒去鹽酸，用水洗泡數(shù)次至中性，將沙子烘干或曬干。另取地面下40～60cm非耕作層貧瘠且粘性較小的土，研碎，100目過(guò)篩,水洗至中性，烘干。將處理后的沙、土按質(zhì)量比2∶1混合?；靹虻纳惩练盅b入安瓿管或小試管中，高度為1cm左右，塞好棉塞，121℃濕熱滅菌30min。隨機(jī)抽取滅菌后的砂土管若干支，無(wú)菌條件下取少許砂土至營(yíng)養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基中，30℃培養(yǎng)24小時(shí)，檢查無(wú)微生物生長(zhǎng)后方可使用。
      2 斜面培養(yǎng)物的制備
      參照定期移植法。
      3 制備菌懸液
     向培養(yǎng)好的斜面培養(yǎng)物中注入3～5mL無(wú)菌水，洗下細(xì)胞或孢子制成菌懸液。用無(wú)菌吸管吸取菌懸液，均勻滴入沙土管中，每管0.2～0.5mL。霉菌可直接挑取孢子拌入沙土管中。
      4 干燥
真空抽去沙土管中水分。
      5 保藏
      將沙土管用火焰熔封后存放于低溫(4～6℃)干燥處保藏，每隔半年檢查一次菌種存活性及純度。或?qū)⑸惩凉苤苯佑门Ｆぜ埢蛩芰霞埌?，置干燥器?nèi)保存。
保藏時(shí)間2～10年。
     6 恢復(fù)培養(yǎng)
     無(wú)菌條件下打開(kāi)沙土管，取部分沙土粒于適宜的斜面培養(yǎng)基上，長(zhǎng)出菌落后再轉(zhuǎn)接一次?；蛉∩惩亮Ｓ谶m宜的液體培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)接斜面。

低溫生物菌種的改良制備

即采用遺傳育種的方法，使菌株(從自然界分離篩選而得的出發(fā)菌株)的遺傳因子 DNA發(fā)生突變、重組，從而從中選出產(chǎn)量高、成品質(zhì)量好或具有新的培養(yǎng)特性如耐產(chǎn)物抑制、能利用廉價(jià)原料以及具有生產(chǎn)新品種能力的優(yōu)良菌種。采用的方法有誘變育種、雜交育種、細(xì)胞融合技術(shù)和重組DNA技術(shù)。誘變育種是利用誘變因子如紫外線、鈷-60、乙烯類等物理或化學(xué)誘變劑處理生產(chǎn)菌株的單孢子懸浮液，以獲得誘發(fā)突變株。隨后進(jìn)行突變株的篩選，從中篩選高產(chǎn)菌株。由于隨機(jī)的突變?nèi)后w中，有益突變所占比例很低，要獲得高產(chǎn)突變株必須進(jìn)行大量篩選?？筛鶕?jù)生物合成途徑中的反應(yīng)點(diǎn),并通過(guò)它們的改變以提高產(chǎn)率或其他特性，如選育抗產(chǎn)物反饋抑制的突變株、增加細(xì)胞透性的突變株及營(yíng)養(yǎng)缺陷型的突變株等。這種"理性篩選法"廣泛應(yīng)用于氨基酸產(chǎn)生菌的選育。

低溫生物菌種的寄主分離法

即從生長(zhǎng)有某種真菌的寄主體上(如茯苓、木耳木段)取下木片，進(jìn)行分離的方法。如木耳制種時(shí)，可選朵大、出耳多、質(zhì)厚的耳棒(即長(zhǎng)有木耳的木段)。采集后，削去耳根下的樹(shù)皮，將其橫斷面鋸成1 厘米厚的木片，在無(wú)菌條件下，切去無(wú)耳菌絲部分，留下有耳菌絲部分，浸入0 . 1 %水中1 分鐘，取出再用無(wú)菌水沖去木片上的液。然后，用解剖刀將木片切成0 . 5 厘米的小塊，放入斜面培養(yǎng)基內(nèi)，置24 ~26 ℃下培養(yǎng)，及時(shí)淘汰雜菌，選取純菌絲進(jìn)行移植培養(yǎng)，即得菌種。