低溫生物菌種的實(shí)驗(yàn)器材

細(xì)菌、酵母菌，霉菌。肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基，滅菌脫脂牛乳，滅菌水，化學(xué)純的液體石蠟，甘油，河沙，瘦黃土或紅土、鹽，干冰，95%酒精，10%鹽酸，無水氯化鈣。滅菌吸管，滅菌滴管，滅菌培養(yǎng)皿，管形安瓿管，淚滴形安瓿管（長頸球形底），40目與 100目篩子，油紙，濾紙條（0.5×1.2cm），干燥器，真空泵，真空壓力表，噴燈，L形五通管，冰箱，低溫冰箱（-30℃），液氮冷凍保藏器。

低溫生物菌種的影響因素有哪些

菌的質(zhì)量：保藏的菌種應(yīng)培養(yǎng)在營養(yǎng)豐富的條件下，使之進(jìn)入穩(wěn)定期，稍老一些的菌體對(duì)環(huán)境抵抗力強(qiáng)。另處，作為冷凍干燥的菌懸液細(xì)胞濃度要高不同的菌對(duì)冷凍干燥的耐受程度不同，如果保存的菌液細(xì)胞濃度不高，就會(huì)使以后傳種造成困難，保存期也會(huì)受到影響。

保護(hù)劑：不同種類的保護(hù)劑對(duì)不同微生物的作用是不同的，如個(gè)別菌種在脫脂乳作保護(hù)劑的情況下失敗率高達(dá)99.99%，而采用葡聚糖等混和保護(hù)劑時(shí)失敗率大大減少。一般情況下，那些容易保存的菌種對(duì)保護(hù)劑的要求不很嚴(yán)格，而不易保存的菌種對(duì)保護(hù)劑的要求卻很苛刻。因此，選擇好的保護(hù)劑是冷凍干燥保存菌種的關(guān)鍵因素。

干燥速度：實(shí)驗(yàn)表明，慢速干燥比快速干燥存活率高，如青霉菌6h干燥存活率為67.3%，而3h為59%。

空氣的影響：冷凍干燥后空氣對(duì)細(xì)菌細(xì)胞影響較大，可導(dǎo)致細(xì)胞損傷進(jìn)而失敗，故在凍干后應(yīng)立即在真空下融封，才有利于長期保存。

溫度的影響：在干燥和真空狀況下溫度的影響遠(yuǎn)沒有上述幾項(xiàng)因素重要，因此可以在室溫下保存，但許多微生物在4℃保存的存活率要比在室溫下高1倍。

含水量的影響：水分含量過高對(duì)菌存活不利，完全脫水也不利于保存，一般把干燥后的細(xì)胞含水量控制在3%以下(1%-3%)

菌種保藏的目的、原理及常用的方法有哪些？

微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過程中，必須使微生物的代謝處于不活躍或相對(duì)靜止的狀態(tài)，才能在一定的時(shí)間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。

低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，所以，菌種保藏方法雖多，但都是根據(jù)這三個(gè)因素而設(shè)計(jì)的。

保藏方法大致可分為以下幾種：

1．傳代培養(yǎng)保藏法

又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細(xì)菌用），培養(yǎng)后于4—6℃冰箱內(nèi)保存。

2．液體石蠟覆蓋保藏法

是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種存活率，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。

3．載體保藏法

是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。

4．寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲、此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。

5．冷凍保藏法

可分低溫冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6．冷凍干燥保藏法

先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。