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信使RNA(mRNA)早先發(fā)現(xiàn)于1960年,在蛋白質(zhì)合成過(guò)程中負(fù)責(zé)傳遞遺傳信息、直接指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成,具有以下特點(diǎn)。
1.含量低,占細(xì)胞總RNA的1%~5%。
2.種類多,可達(dá)105種。不同基因表達(dá)不同的mRNA。
3.壽命短,不同mRNA指導(dǎo)合成不同的蛋白質(zhì),完成使命后即被降解。細(xì)菌mRNA的平均半衰期約為1.5分鐘。脊椎動(dòng)物mRNA的半衰期差異極大,平均約為3小時(shí)。
4.長(zhǎng)度差異大哺乳動(dòng)物mRNA長(zhǎng)度為5×102~1×105nt原核生物與真核生物的mRNA雖然在結(jié)構(gòu)上有差異,但功能一樣,都是指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成的模板。
tRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)
約50%堿基配對(duì),形成四段雙螺旋,與五段非配對(duì)序列形成三葉草形結(jié)構(gòu)。
該結(jié)構(gòu)中存在四臂四環(huán):
①氨基酸臂。
②二氫尿C4H4N2臂(DHU臂、D臂)和二氫尿C4H4N2環(huán)(DHU環(huán)、D環(huán)),特征是含二氫尿C4H4N2(DHU、D)。
③反密碼子臂和反密碼子環(huán),特征是反密碼子環(huán)含反密碼子。反密碼子5′端與尿苷酸連接,3′端與piao呤核苷酸連接。TΨC臂(T臂)和TΨC環(huán)(Ψ環(huán)),特征是TΨC環(huán)含胸腺C4H4N2核糖核苷酸T54假尿苷酸Ψ55胞苷酸C56。
④額外環(huán)3~21nt。
tRNA三級(jí)結(jié)構(gòu)呈L形,氨基酸結(jié)合位點(diǎn)位于其一端,反密碼子環(huán)位于其另一端,DHU環(huán)和TΨC環(huán)雖然在二級(jí)結(jié)構(gòu)中位于兩側(cè),但在三級(jí)結(jié)構(gòu)中卻相鄰。盡管各種tRNA的長(zhǎng)度和序列不盡相同,但其三級(jí)結(jié)構(gòu)相似,提示三級(jí)結(jié)構(gòu)與其功能密切相關(guān)。
RNA試劑盒注意事項(xiàng)
所有相關(guān)器皿耗材都應(yīng)為RNase-free產(chǎn)品,操作過(guò)程要小心,帶口罩、手套避免環(huán)境中RNA酶污染樣品。
RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之間,但這并不表示RNA不純,需電泳檢測(cè)。
使用時(shí)一定要根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要購(gòu)買(mǎi)專1用提取試劑盒, 如果不是專1用試劑盒,或許能提出RNA,但不能確保其質(zhì)量以及完整性,會(huì)影響RT-PCR、Northern blot、Dot blot、Real time RT PCR、芯片分析、polyA 篩選、體外翻譯、RNase 保護(hù)分析、分子克1隆等后續(xù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
當(dāng)前提取效果好的是RNA提取試劑盒,但其售價(jià)較高,單次實(shí)驗(yàn)費(fèi)用花費(fèi)太大,對(duì)精度要求不高的實(shí)驗(yàn)沒(méi)有必要購(gòu)買(mǎi),當(dāng)然還有其它的進(jìn)口試劑盒,但是均存在價(jià)格高、訂貨周期長(zhǎng)的問(wèn)題(如果碰上國(guó)內(nèi)無(wú)貨的時(shí)候,要從國(guó)外發(fā)貨,會(huì)等很長(zhǎng)一段時(shí)間)。普通的提取實(shí)驗(yàn)用國(guó)產(chǎn)的試劑盒就足以,價(jià)格不高,基本上各地均有現(xiàn)貨,如天根(國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒中銷售面比較廣的一種)等,其價(jià)格比進(jìn)口試劑盒要便宜許多,且效果還不錯(cuò),性價(jià)比還可以