熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization, FISH）是一種分子細胞遺傳學技術，是20世紀80年代末期發(fā)展起來的一種非放6射性原位雜交技術。目前這項技術已經(jīng)廣泛應用于動植物基因組結構研究、染色體結構變異分析、病毒感5染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫5瘤遺傳學和基因組進化研究等許多領域。FISH的基本原理是用熒光標記的單鏈核酸為探針，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行特異性結合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。可用熒光標記的探針直接與染色體進行雜交從而對基因進行染色體定位。

原位雜交(In Situ Hybridization)也叫原位雜交組化(in situ hybridization histochemistry, ISHH)，是一種固相分子雜交的方法，bai它是用標記的DNA或RNA為探針，在原位檢測組織或細胞內特定核酸序列的方法。探針的種類按所帶標記物可分為同位素標記探針和非同位素標記探針兩大類。常用的同位素標記物有3H、35S、125I和32P，非同位素標記物中目前很常用的有生物素、地高6辛和熒光素三種。探針的種類按核酸性質不同又可分為DNA探針、cDNA探針、RNA探針和合成寡核苷酸探針。

原位雜交術可在原位檢測細胞合成某種多肽或蛋白質的基因表達，有很高的敏感性和特異性，已成為細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。

多種探針標記檢測系統(tǒng)

基于地高3辛、生物素和熒光標記分子的標記和檢測系統(tǒng)是常見的原位雜交檢測方法。

熒光標記檢測常為直接探針標記方法，如在dUTP/UTP/ddUTP上連接Fluorescein后進行核酸標記。由于標記在核酸上的熒光分子必須經(jīng)受雜交和洗脫過程中的考驗，以及熒光分子易于衰減，其檢測靈敏度受到一定的影響。但對熒光分子的直接檢測呈現(xiàn)的背景較低。

根據(jù)不同的雜交實驗要求，應選擇不同的核酸探針。在大多數(shù)情況下，可以選擇克0隆的DNA或cDNA雙鏈探針。但是在有些情況下，必須選用其它類型的探針如寡核苷酸探針和RNA探針。例如，在檢測靶序列上的單個堿基改變時應選用寡核苷酸探針，在檢測單鏈靶序列時應選用與其互補的DNA單鏈探針（通過克0隆人M13噬菌體DNA獲得）或RNA探針，寡核苷酸探針也可。長的雙鏈DNA探針特異性較強，適宜檢測復雜的靶核苷酸序列和病原體 ，但不適宜于組織原位雜交，因為它不易透過細胞膜進入胞內或核內。在這種情況下，寡核苷酸探針和短的PCR標記探針（80～150bp）具有較大的優(yōu)越性。