蛋白質(zhì)含量測(cè)定方法之雙縮脲法（biuret法）

實(shí)驗(yàn)原理雙縮脲（NH3CONHCONH3）是兩個(gè)分子脲經(jīng)180℃左右加熱，放出一個(gè)分子氨后得到的產(chǎn)物。在強(qiáng)堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物，稱為雙縮脲反應(yīng)。凡具有兩個(gè)酰胺基或兩個(gè)直接連接的肽鍵，或能過一個(gè)中間碳原子相連的肽鍵，這類化合物都有雙縮脲反應(yīng)。

紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無關(guān)，故可用來測(cè)定蛋白質(zhì)含量。測(cè)定范圍為1-10mg蛋白質(zhì)。干擾這一測(cè)定的物質(zhì)主要有：硫酸銨、tris緩沖液和某些氨基酸等。

此法的優(yōu)點(diǎn)是較快速，不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近，以及干擾物質(zhì)少。主要的缺點(diǎn)是靈敏度差。因此雙縮脲法常用于需要快速，但并不需要十分準(zhǔn)確的蛋白質(zhì)測(cè)定。    

胰蛋白酶與胰酶的區(qū)別

胰酶與胰蛋白酶的是同一種物質(zhì)嗎？相信很多人并不能分清兩者的區(qū)別。胰酶顧名思義是由動(dòng)物胰臟中提取的多種酶組成的混合物酶制劑，主要為胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶，其主要成分為胰蛋白酶。要想更深入的了解兩者的關(guān)系，我們先從人體內(nèi)zui重要的器1官胰臟說起。

胰1腺分泌出的胰液含有胰蛋白蛋白酶、胰脂肪酶、胰淀粉酶，主要成分為胰蛋白酶，屬肽鏈內(nèi)切酶。胰臟是我們身體上一個(gè)非常不顯眼的小器1官——胰臟，胰臟有兩部分，一是胰1腺，是外分泌腺，產(chǎn)生胰液；二是胰島，是內(nèi)分1泌腺，產(chǎn)生胰島素，胰1腺分泌出的胰液經(jīng)胰管輸入到十二指腸，胰液含有胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶等多種物質(zhì)，可作用于腸道分解蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。

胰蛋白酶是由胰1腺分泌的一種蛋白水解酶，在動(dòng)物中作為消化酶而起作用，主要作用于精氨酸或賴氨酸羧基端的肽鍵，蛋白質(zhì)分解為氨基酸、氨基酸多肽等，再被人體腸道吸收到人體各組織中去，所以胰蛋白酶在食物消化中起到至關(guān)重要的作用。

整體結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)是以氨基酸為基本單位構(gòu)成的生物高分子。蛋白質(zhì)分子上氨基酸的序列和由此形成的立體結(jié)構(gòu)構(gòu)成了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的多樣性。蛋白質(zhì)具有一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)、四級(jí)結(jié)構(gòu)，蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)決定了它的功能。一級(jí)結(jié)構(gòu)（primary structure）：氨基酸殘基在蛋白質(zhì)肽鏈中的排列順序稱為蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)，每種蛋白質(zhì)都有而確切的氨基酸序列。二級(jí)結(jié)構(gòu)（secondary structure）：蛋白質(zhì)分子中肽鏈并非直鏈狀，而是按一定的規(guī)律卷曲（如α-螺旋結(jié)構(gòu)）或折疊（如β-折疊結(jié)構(gòu)）形成特定的空間結(jié)構(gòu)，這是蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)主要依靠肽鏈中氨基酸殘基亞氨基（-NH-）上的氫原子和羰基上的氧原子之間形成的氫鍵而實(shí)現(xiàn)的。三級(jí)結(jié)構(gòu)（tertiary structure）：在二級(jí)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，肽鏈還按照一定的空間結(jié)構(gòu)進(jìn)一步形成更復(fù)雜的三級(jí)結(jié)構(gòu)。肌紅蛋白，血紅蛋白等正是通過這種結(jié)構(gòu)使其表面的空穴恰好容納一個(gè)血紅素分子。四級(jí)結(jié)構(gòu)（quaternary structure）：具有三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽鏈按一定空間排列方式結(jié)合在一起形成的聚集體結(jié)構(gòu)稱為蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)。如血紅蛋白由4個(gè)具有三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽鏈構(gòu)成，其中兩個(gè)是α-鏈，另兩個(gè)是β-鏈，其四級(jí)結(jié)構(gòu)近似橢球形狀。


連接方法用約20種氨基酸作原料，在細(xì)胞質(zhì)中的核糖體上，將氨基酸分子互相連接成肽鏈。一個(gè)氨基酸分子的氨基和另一個(gè)氨基酸分子的羧基，脫去一分子水而連接起來，這種結(jié)合方式叫做脫水縮合。通過縮合反應(yīng)，在羧基和氨基之間形成的連接兩個(gè)氨基酸分子的那個(gè)鍵叫做肽鍵。由肽鍵連接形成的化合物稱為肽。檢測(cè)方法分別向甲、乙兩支試管加入3毫升蛋清稀釋液和清水，再依次向兩支試管中加入雙縮脲試劑A液和B液。觀察甲、乙兩試管中溶液發(fā)生的顏色變化。上述的演示實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，雙縮脲試劑與蛋白質(zhì)呈現(xiàn)紫色反應(yīng)。