低溫生物菌種的保存方法有哪些？

（一）培養(yǎng)基保存法

利用各種斜面和半固體培養(yǎng)基，加上石蠟油保存菌種，是一種簡易的保存方法。

1.普通瓊脂斜面保存法：腸道菌、等一般細(xì)菌可接種于不含糖的普通瓊脂斜面上，斜面底部應(yīng)加少許無糖肉膏湯，以防干涸。經(jīng)35℃培養(yǎng)18～24h后，移種于4℃冰箱中，一般可保存一個月，每月傳代一次。

2.血液瓊脂斜面保存法：鏈球菌、應(yīng)接種于血液瓊脂斜面上，35℃培養(yǎng)生長后，置4℃冰箱中保存，鏈球菌須半個月至1個月移種一次，新分離菌株須2～4天移種一次，以后逐漸延長移種時間，在適應(yīng)后可延至半個月移種一次。

3.巧克力色斜面保存法：宜保存菌，并在35℃孵箱中保存，一般每2天移種一次。

4.雞蛋斜面保存法：適于保存含有Vi抗原的沙門菌屬及其他含表面抗原的細(xì)菌，一般可保存一個月。

5.半固體穿刺保存法：將細(xì)菌接種于瓊脂半固體或瓊脂半固體內(nèi)，經(jīng)35℃培養(yǎng)18～24h，再以無菌方法加入滅菌的液體石蠟。高度約lcm，置4℃冰箱保存。保存時間可達(dá)3～6個月。

（二）干燥保存法

原理是將細(xì)菌體內(nèi)的水分蒸發(fā)掉，使其處于休眠和代謝停滯狀態(tài)，從而達(dá)到長期保存菌種的目的醫(yī)|學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。菌種干燥后低溫保存，可保存數(shù)年至十幾年。

（三）冷凍干燥保存法

本法又稱冷凍真空干燥法。它綜合利用了各種有利于菌種保存的因素（低溫、干燥和缺氧等），是目前有效的菌種保存方法之一。用本法保存的菌種具有成活率高，變異性小等優(yōu)點，保存期一般3～5年，有的可長達(dá)10年以上。

（四）脫脂牛奶保存法

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                                                          低溫生物菌種的制備是什么？

將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。放線孢子的培養(yǎng)基大多是采用麩皮或豌豆浸出液、牛肉膏及無機鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴大的扁瓶孢子培養(yǎng)基中,于28～37℃培養(yǎng)5～14天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐 (6)的種子。如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶（5）液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應(yīng)是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿等）,及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐(7)的種子應(yīng)是生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

低溫生物菌種純化方法

1、傾注平板法

首先把微生物懸液通過一系列稀釋，取一定量的稀釋液與熔化好的保持在40~50°左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基充分混合，然后把這混合液傾注到無菌的培養(yǎng)皿中，待凝固之后，把這平板倒置在恒箱中培養(yǎng)。單一細(xì)胞經(jīng)過多次增殖后形成一個菌落，取單個菌落制成懸液，重復(fù)上述步驟數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)物 2、涂布平板法

首先把微生物懸液通過適當(dāng)?shù)南♂?，取一定量的稀釋液放在無菌的已經(jīng)凝固的營養(yǎng)瓊脂平板上，然后用無菌的玻璃刀把稀釋液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上，經(jīng)恒溫培養(yǎng)便可以得到單個菌落。3、平板劃線法

簡單的分離微生物的方法是平板劃線法。用無菌的接種環(huán)取培養(yǎng)物少許在平板上進(jìn)行劃線。劃線的方法很多，常見的比較容易出現(xiàn)單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、四格法等。當(dāng)接種環(huán)在培養(yǎng)基表面上往后移動時，接種環(huán)上的菌液逐漸稀釋，然后在所劃的線上分散著單個細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)，每一個細(xì)胞長成一個菌落。

2、富集培養(yǎng)法

富集培養(yǎng)法的方法和原理非常簡單。我們可以創(chuàng)造一些條件只讓所需的微生物生長，在這些條件下，所需要的微生物能有效地與其他微生物進(jìn)行競爭，在生長能力方面遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其他微生物。所創(chuàng)造的條件包括選擇合適的碳源、能源、溫度、光、pH、滲透壓和氫受體等。在相同的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下，經(jīng)過多次重復(fù)移種，然后富集的菌株很容易在固體培養(yǎng)基上長出單菌落。如果要分離一些專性寄生菌，就必須把樣品接種到相應(yīng)敏感宿主細(xì)胞群體中，使其大量生長。通過多次重復(fù)移種便可以得到純的寄生菌。