液相色譜工作原理

儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相) 內, 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對運動時, 經(jīng)過反復多次的吸附- 解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分離成單個組分依次從柱內流出, 通過檢測器時, 樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。

液相色譜儀分類

      液相色譜儀依據(jù)樣品在固定相和流動相分離過程的物理化學原理，可分為以下五種。

　　1、吸附色譜：

　　用固體吸附劑作固定相，以不同極性溶劑作流動相，依據(jù)樣品中各組分在吸附劑上吸附性能的差別來實現(xiàn)分離。

　　2、分配色譜：

　　用載帶在固相基體上的固定液作固定相，以不同極性溶質作流動相，依據(jù)樣品中各組分在固定液上分配性能的差別來實現(xiàn)分離。根據(jù)固定相和液體流動相相對極性的差別，又可分為正相分配色譜和反相分配色譜。當固定相的極性大于流動相的極性時，可稱為正相分配色譜或簡稱正相色譜;若固定相的極性小于流動相的極性時，可稱為反相分配色譜或簡稱反相色譜。

3、離子色譜：

　　用微粒離子交換劑作固定相，以具有一定pH值的緩沖溶液作流動相，依據(jù)離子型化合物中各離子組分與離子交換劑上表面帶電荷基團進行可逆性離子交換能力的差別而實現(xiàn)分離。

　　4、體積排阻色譜：

　　用化學惰性的多孔性凝膠作固定相，按固定相對樣品中各組分分子體積排阻滯作用的差別來實現(xiàn)分離。以水溶液作流動相的體積排阻色譜柱，稱為凝膠過濾色譜;以有作流動相的體積排阻色譜法，稱為凝膠滲透色譜法。

　　5、親和色譜：

　　以在不同基體上，鍵合多種不同特性的配位體作固定相，用具有不同pH值的緩沖溶液作流動相，依據(jù)生物分子與基體上鍵聯(lián)的配位體之間存在特異性親和作用能力的差別，而實現(xiàn)對具有生物活性的生物分子的分離。

液相色譜的操作步驟

1).首先對流動相進行過濾，根據(jù)需要選擇不同的濾膜，一般為有機系和水系，常用的孔徑為0.20um和0.45um。

2).對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。

3).正常情況下，儀器首先用甲醇沖洗10-20分鐘，然后再進入測試用流動相(如流動相為緩沖試劑，則要二次重蒸水沖洗10-20分鐘，直至色譜柱中有機相沖凈為止)。

4).一般情況下，流動相沖洗20-30分鐘后，儀器方可穩(wěn)定，重要的是儀器基線走后，方可進樣測試。

5).同時進兩針標樣，將其結果相比較，其結果的比值在0.98-1.02之間后，就可以正式進行樣品的測試了。

6).樣品測試結束后，就要進行色譜儀及色譜柱的清洗和維護。如流動相為緩沖試劑，同樣也要用重蒸水清洗10-20分鐘，方可用有機相進行保護，否則，有損色譜柱。

7).關機時，先關計算機，再關液相色譜。

8).填寫登記本，由負責人簽字。