廣州碩譜生物科技有限公司Card-GCB固相萃取柱選擇

固相萃取操作中常見的問題

回收率低在一次完整的SPE操作中，目標(biāo)化合物可能會(huì)存在于樣品溶液流出液、淋洗液、洗脫液或吸附劑中，當(dāng)“目標(biāo)物沒有回收或回收率低” 現(xiàn)象發(fā)生時(shí)，可向樣品溶液加入標(biāo)液，然后進(jìn)行完整的SPE操作并將樣品流出液、淋洗液和洗脫液分別收集并分析。

首先確定目標(biāo)化合物存在于哪一部分，進(jìn)而確定問題來自下列哪一環(huán)節(jié)：目標(biāo)化合物在吸附劑上保留不足；目標(biāo)化合物未被完全洗脫；其他環(huán)節(jié)。

由于許多化合物同時(shí)具有多種官能團(tuán)，在選擇固相萃取機(jī)理時(shí)，應(yīng)該根據(jù)目標(biāo)化合物及干擾物的性質(zhì)來考慮采用哪種萃取機(jī)理較為有利。如：2-萘胺是一個(gè)弱堿性化合物（pKa=4.16），在一定的pH條件下還可以呈陽(yáng)離子狀態(tài)，同時(shí)該化合物具有疏水的非極性官能團(tuán)及親水的極性官能團(tuán)。這時(shí)，就應(yīng)該根據(jù)樣品基質(zhì)的具體情況來選擇有利于將目標(biāo)化合物與干擾物分離的萃取機(jī)理。如果樣品基質(zhì)中同時(shí)含有大量的非極性干擾雜質(zhì)，就應(yīng)該避免采用非極性的萃取機(jī)理，而將樣品的pH調(diào)節(jié)到低于其pKa兩個(gè)pH單位，即pH=2.16，并采用陽(yáng)離子交換機(jī)理。反之，如果樣品中同時(shí)含有大量的陽(yáng)離子干擾雜質(zhì)，則應(yīng)該調(diào)節(jié)樣品的pH至6.16（高于pKa兩個(gè)單位），采用非極性萃取機(jī)理較為有利。

固相萃取(Solid Phase Extraction，簡(jiǎn)稱 SPE)是20世紀(jì)70年代中期發(fā)展起來的樣品前處理技術(shù)，其用途廣泛，并日益受到人們的歡迎。按吸附劑填料和吸附機(jī)理的不同，主要分為正相、反相、離子交換和混合固相萃取小柱，采用正相、反相固相萃取小柱，主要用于萃取分離極性和非極性化合物，但對(duì)某些帶電物質(zhì)(離子化合物)的萃取回收率較低，如C18填料的固相萃取小柱，當(dāng)目標(biāo)化合物為離子態(tài)時(shí)，C18對(duì)該化合物的影響較小。針對(duì)這個(gè)問題，月旭推出了離子交換固相萃取硅膠基質(zhì)和聚合物基質(zhì)小柱。

凈化效果不理想

凈化模式的改進(jìn)通常而言采用保留目標(biāo)化合物的模式比保留雜質(zhì)的模式凈化效果好，如果正在分析的項(xiàng)目為某一種或某一類化合物分析，zui好是采用保留目標(biāo)化合物的凈化模式；舉一個(gè)簡(jiǎn)單的例子，同樣是分析蔬菜中的多菌靈(一類堿性農(nóng)1藥)，使用陽(yáng)離子交換柱可以專一性地保留這些農(nóng)1藥，使它們基本與干擾物完全分離，而使用正相吸附劑或石墨化炭黑進(jìn)行保留干擾物的操作僅能把主要的干擾物除去，仍有較多干擾物存留。

另外，如果不止一種SPE柱可用于目標(biāo)化合物的凈化時(shí)，應(yīng)挑選選擇性好的吸附劑；選擇性方面，離子交換＞正相＞反相。

常見反相鍵合硅膠吸附劑的類型

C8柱

C8柱的主要官能團(tuán)辛基( octyl)。其主要作用力是非極性，第二作用力是極

性、陽(yáng)離子交換。C8的性質(zhì)與C18十分相近，但由于其支鏈烷烴沒有C18長(zhǎng)，所以對(duì)非極性化合物的吸附能力沒有C18強(qiáng)。正因?yàn)槿绱?，?duì)于一些在C18上吸附太強(qiáng)而難以洗脫的化合物，可以用C8來取代。因?yàn)镃8的碳鏈較短，不能覆蓋硅膠的表面，其極性作用力比C18要強(qiáng)。盡管如此，極性作用力依然不是C8的主要作用力。

淋洗液和洗脫液的優(yōu)化對(duì)于反相模式和正相模式，應(yīng)在不影響回收率的前提下，增大淋洗液洗脫的強(qiáng)度并降低洗脫液的洗脫強(qiáng)度。

對(duì)于反相模式，可將目標(biāo)化合物的水溶液上樣，然后依次用5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%的甲1醇水溶液洗脫，分別收集洗脫液分析，建立淋洗曲線，找出目標(biāo)化合物被洗脫時(shí)的溶劑體系，淋洗液中甲1醇的含量應(yīng)稍低于目標(biāo)化合物恰好被洗脫時(shí)的溶劑體系，而洗脫液中甲1醇的含量應(yīng)稍高于目標(biāo)化合物恰好被完全洗脫時(shí)的溶劑體系；當(dāng)純甲1醇不能洗脫目標(biāo)化合物時(shí)，應(yīng)試驗(yàn)甲1醇-甲1基shu丁基醚混合溶液的洗脫曲線；對(duì)于某些既不溶于水也不溶于甲1醇的離子型化合物，可以在溶劑體系中加入酸或堿。