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博日養(yǎng)殖場熒光定量PCR的行業(yè)須知

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發(fā)布時間:2020-11-08 07:32  






廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。專門的熱循環(huán)儀配備熒光檢測模塊,用于監(jiān)測擴(kuò)增時的熒光,檢測到的熒光信號反映了每個循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物的量。我們的客戶對象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。

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一、在動物檢疫中對生豬及其產(chǎn)品開展非洲病毒檢測,應(yīng)當(dāng)使用我部批準(zhǔn)或經(jīng)中國動物疫病預(yù)防控制中心比對符合要求的檢測方法及檢測試劑盒(試紙條),確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確。PCR技術(shù)是目前最i簡單、快速的分子學(xué)檢測方法,但該方法的敏感性有限,因此以PCR為基礎(chǔ)的更新方法應(yīng)運(yùn)而生。符合要求的檢測方法及檢測試劑盒(試紙條)可從中國動物疫病預(yù)防控制中心網(wǎng)站查詢。二、應(yīng)急期間,比對符合要求的檢測試劑盒(試紙條)可使用至2019年6月30日。三、各地畜牧獸醫(yī)管理部門要加強(qiáng)對非洲病毒檢測試劑盒(試紙條)生產(chǎn)企業(yè)及其產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)管,確保產(chǎn)品質(zhì)量符合要求。


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豬肉制品加工企業(yè)在生豬產(chǎn)品原料中檢出非洲病毒核酸陽性的,應(yīng)當(dāng)立即封存陽性樣品的同批次原料并報告所在地市場監(jiān)管、畜牧獸醫(yī)部門,并將陽性樣品送至具有檢測資質(zhì)的單位復(fù)檢。自動化操作提高了工作效率,反應(yīng)快速、重復(fù)性好、靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果清晰。復(fù)檢為陽性的,企業(yè)要在當(dāng)?shù)厥袌霰O(jiān)管、畜牧獸醫(yī)部門監(jiān)督下,按規(guī)定對同批次生豬產(chǎn)品原料進(jìn)行無害化處理,對相關(guān)場所進(jìn)行徹i底清洗消毒。


廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。短距離可經(jīng)空氣傳播、污染的飼料、泔水、剩菜及肉屑、欄舍、車輛、器具和衣服等均可間接傳播本病。我們的客戶對象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。

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豬肉制品加工企業(yè)、生豬產(chǎn)品經(jīng)營者采購生豬產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)批批查驗(yàn)其動物檢疫合格證明、肉品品質(zhì)檢驗(yàn)合格證明以及非洲病毒檢測結(jié)果(報告),確保購進(jìn)的生豬產(chǎn)品不帶非洲病毒;采購的進(jìn)口生豬產(chǎn)品應(yīng)附有合法的入境貨物檢驗(yàn)檢疫合格證明。注意:這里說的時間,不單純是消毒所用的時間,更重要的是病原體與消毒i藥接觸的有效時間。不得采購沒有非洲病毒檢測結(jié)果(報告)及未經(jīng)檢疫或者檢疫不合格的生豬產(chǎn)品,確保豬肉制品和經(jīng)營的生豬產(chǎn)品不含非洲病毒。

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所謂real-time Q-PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號累積實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定報告動物疫病,該病也是我國防范的一類動物疫情。在real-time 技術(shù)的發(fā)展過程中,兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用:(1)在90年代早期,Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn),它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。(2)此后熒光雙標(biāo)記探針的運(yùn)用使在一密閉的反應(yīng)管中能實(shí)時地監(jiān)測反應(yīng)全過程。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運(yùn)用。



廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。常規(guī)PCR中,擴(kuò)增產(chǎn)物(擴(kuò)增子)是通過終點(diǎn)法來分析檢測,即PCR反應(yīng)結(jié)束后,DNA通過瓊脂糖凝膠電泳,然后進(jìn)行成像分析。我們的客戶對象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。

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非洲為何難以控制?非洲病毒基因組全長 170~190 kb,為有囊膜的雙鏈 DNA 病毒,病毒粒子大小為 175~215 nm,呈正二十面體結(jié)構(gòu),也是唯i一的蟲媒DNA病毒。一般用于mRNA轉(zhuǎn)錄水平的定量研究、不同樣本或基因組中DNA拷貝數(shù)的測定、基因芯片結(jié)果驗(yàn)證、藥i效分析等。非洲病毒是一種急性、熱性、高度接觸性傳i染病,引起豬的死i亡率可達(dá)100%,并且非洲具有潛伏期,即使感i染病毒,但沒有臨床癥狀,就有可能通過非實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)關(guān)卡流入市場,進(jìn)而導(dǎo)致下游食品企業(yè)相關(guān)問題的出現(xiàn)。

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非洲與傳統(tǒng)相似且綜合癥狀復(fù)雜難辨,臨床上類似于急性,表現(xiàn)為高熱、皮膚充血、流i產(chǎn)、水腫和臟器出血。01℃的定量PCR儀,而該公司新近推出的Rotor-Gene6000更可達(dá)到±0。我國因之前不屬于非洲i疫情國家,因此沒有相關(guān)的針對性研究,目前采用的是原農(nóng)i業(yè)部檢疫所于1997年與美國梅島動物病研究所共同研究的檢測方法,主要是PCR和ELISA,標(biāo)準(zhǔn)遵循GB/T 18648-2002非洲診斷技術(shù)。隨著相關(guān)檢測技術(shù)的發(fā)展,對于非洲的檢測方法也更加完善。PCR技術(shù)是目前i簡單、快速的分子學(xué)檢測方法,但該方法的敏感性有限,因此以PCR為基礎(chǔ)的更新方法應(yīng)運(yùn)而生。


廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。廣州勱博--養(yǎng)殖場PCRPCR檢測同熒光PCR類似,都是使用的引物和探針以VP72編碼區(qū)域作為靶基因設(shè)計(jì),該基因研究清楚,且高度保守,即使在滅活或降解的樣品中也可檢測到已知所有22種p72病毒基因型的多個毒株。我們的客戶對象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。

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非洲病毒的附著力到底有多強(qiáng)?直接接觸或者攜帶病毒的物品再次傳播的能力有多強(qiáng)?尚不清晰。Ct值的含義是:每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達(dá)到設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。目前已知非洲是高度接觸性傳播的急性、烈性i病毒,主要通過接觸或采食受非洲病毒污染的物品,以及通過昆蟲吸血而傳i染。短距離可經(jīng)空氣傳播、污染的飼料、泔水、剩菜及肉屑、欄舍、車輛、器具和衣服等均可間接傳播本病。而且目前公認(rèn)ASFV對外界的抵抗力強(qiáng),在自然條件下可以長時間保持感i染性,可以在血液、糞便和各種組織中長期保持感i染性。含有病毒的血液是該病發(fā)生傳播的重要因素。

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非洲(African Swine Fever,ASF)是由非洲病毒(African Swine Fever Virus,ASFV)引起的一種急性、烈性、高度接觸性傳i染病,致死率100%。廣州勱博--養(yǎng)殖場核酸提取純化傳統(tǒng)的PCR定量是應(yīng)用終點(diǎn)PCR來對樣品中的模板量進(jìn)行定量,通常用凝膠電泳分離,并用熒光染色來檢測PCR反應(yīng)的最終擴(kuò)增產(chǎn)物。自2018年8月寧省沈陽市發(fā)生第i一起非洲i疫情起,目前全國已有29個省115個地方發(fā)生非洲i疫情,已撲殺數(shù)百萬頭生豬,直接經(jīng)濟(jì)損失數(shù)百億元。目前全世界都沒有有效的非洲i疫i苗進(jìn)行預(yù)防,現(xiàn)在有效的防控方法仍然是對非洲病毒進(jìn)行檢測,根據(jù)檢測結(jié)果,對發(fā)生疫情的地方嚴(yán)防死守,對疫點(diǎn)地區(qū)生豬全部撲殺,進(jìn)行無害化處理,防止疫情的擴(kuò)散。


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