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ELISA試劑盒的組成結構
1、 操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
5、 保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
此IBL試劑盒能用于小鼠清,EDTA血漿,細胞上清中白介素-6的定量檢測。
ELISA試劑盒的發(fā)展前景
臨床測定技術的發(fā)展主要在于方法學的發(fā)展,而方法學的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術不斷進步更新和型標記物的應用。分子生物學正在并肯定會讓對整個生命科學有一個徹底的認識,其對測定技術發(fā)展的影響也是直接而又有效的,對以前一些難以檢測的生物活性物質的測定,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。
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Elisa試劑盒技術原理
(1). 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。
(2). 結合在固相載體表面a的抗原或抗體仍保持其活性。
(3). 酶標記的抗原或抗體既保留其活性,又保留酶的活性。
(4). 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。
(5). 此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重復性好。以反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的有效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。
Elisa試劑盒操作步驟
1.用蓋片鑷Elisa試劑盒將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中;
5.將Elisa試劑盒培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及細胞化學檢測。