親和柱——親和層析原理

親和層析原理：利用生物分子之間的專一性識(shí)別性或特定的相互作用的分離技術(shù)稱為親和分離技術(shù)。在該技術(shù)中，親和分離過程是通過引入親和配基得以實(shí)現(xiàn)的。所謂親和配基，是指具有對(duì)生物分子專一識(shí)別性或特異相互作用的物質(zhì)。將親和配基固定在不同的介質(zhì)上，可得到不同的親合分離技術(shù)，如固定在層析介質(zhì)上，達(dá)到專一性層析分離的技術(shù)稱為親和層析技術(shù)。將親和配基接在分離膜上，得到親和膜分離技術(shù)。

親和柱——親和層析的分離原理

生物體中許多大分子化合物具有與其結(jié)構(gòu)相對(duì)應(yīng)的專一分子可逆結(jié)合的特性，如抗原與抗體，酶與底物或抑制，與受體等，這種結(jié)合往往是專一的而且是可逆的，生物分子間的這種結(jié)合力稱為親和力，親和層析的分離原理簡(jiǎn)單地說(shuō)就是通過將具有親和力的兩個(gè)分子中的一個(gè)固定在不溶性的基質(zhì)（也稱載體）上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，對(duì)另一個(gè)分子進(jìn)行分離純化。被固定在基質(zhì)上的分子稱為配體，配體與基質(zhì)共價(jià)結(jié)合，構(gòu)成親和層析的固定相，稱為親和吸附劑，蛋白質(zhì)的生物特異性可以幫助選擇特異性的配體，一般是目的蛋白質(zhì)與配體結(jié)合而不吸附雜質(zhì)。蛋白質(zhì)吸附后再利用洗脫液的快速變換和加入競(jìng)爭(zhēng)劑的方法進(jìn)行洗脫。

親和柱——親和層析的應(yīng)用

抗原和利用抗原、之間高特異的親和力而進(jìn)行分離的方法又稱為親和層析。例如將抗原結(jié)合于親和層析基質(zhì)上，就可以從中分離其對(duì)應(yīng)的。在蛋白質(zhì)工程菌發(fā)酵液中所需蛋白質(zhì)的濃度通常較低，用離子交換、凝膠過濾等方法都難于進(jìn)行分離，而親和層析則是一種非常有效的方法。將所需蛋白質(zhì)作為抗原，經(jīng)動(dòng)物后制備，將與適當(dāng)基質(zhì)偶聯(lián)形成親和吸附劑，就可以對(duì)發(fā)酵液中的所需蛋白質(zhì)進(jìn)行分離純化。抗原、間親和力一般比較強(qiáng)，其解離常數(shù)為108－10?12M，所以洗脫時(shí)是比較困難的，通常需要較強(qiáng)烈的洗脫條件?？梢圆扇∵m當(dāng)?shù)姆椒ㄈ绺淖兛乖?、種類或使用類似物等來(lái)降低二者的親和力，以便于洗脫。

另外金黃色球菌蛋白A（ProteinA）能夠與球蛋白G（IgG）結(jié)合，可以用于分離各種IgG。