1.刺激的和非刺激的細(xì)胞裂解液

2.蛋白酶抑l制劑

3. 4°C管搖桿或搖床

4. 0.5 M EDTA，pH8.0

5. 1 M氯化鎂

6. 2倍還原SDS-PAGE樣品緩沖液

7.電泳和免l疫印跡系統(tǒng)

8.免l疫印跡洗滌緩沖液，例如TBST（10 mM Tris-HCl，pH 7.4，0.15 M NaCl，0.05％

吐溫20）

9.免l疫印跡封閉緩沖液（TBST包含5％脫脂奶粉或3％BSA）

10. PVDF或硝l酸纖維素膜

11.二抗

12. ECL檢測(cè)試劑

當(dāng)前沒(méi)有直接測(cè)定法來(lái)測(cè)量Arl1 GTPases的激l活。

NewEast Biosciences Arl1激l活檢測(cè)試劑盒基于特定于配置的單克l隆抗l體，該抗l體特異性識(shí)別Arl1-GTP，但不能識(shí)別Arl1-GDP。 鑒于單克l隆抗l體對(duì)其抗原的高度親和力，可以在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行激l活測(cè)定。 該測(cè)定法可提供可靠的結(jié)果，并具有一致的可重復(fù)性。

試劑盒成分

特異性識(shí)別Cdc42活性構(gòu)象的鼠單克l隆抗l體（Anti-active Cdc42, Mouse MonoclonalAntibody (Catalog No. 26905)）：小管裝--30ul (抗l體濃度是1mg/ml)，抗l體溶于PBS（pH7.4）并包含50%的甘油和0.05%的疊氮l化鈉。此抗l體可以特異性識(shí)別所有脊椎動(dòng)物中的Cdc42-GTP。

Protein A/G agarose (Catalog No. 30301) ：小管裝—400ul包含200ul Protein A/G agarose     和200ul 20%乙醇溶液。（使用時(shí)溶液需要充分混勻，再吸?。?

5X Assay/Lysis Buffer (Catalog No. 30303)：小瓶裝—30mL包含250 mM Tris-HCl (pH 8.0),     750 mM NaCl, 50 mM MgCl2, 5 mM EDTA, 5% Triton X-100。

特異性識(shí)別Cdc42活性構(gòu)象的兔多克l隆抗l體（Anti-Cdc42, Rabbit Polyclonal Antibody  (Catalog No.21010)）：小管裝--30ul (抗l體濃度是1mg/ml)，抗l體溶于PBS（pH 7.4）并包含有   50%的甘油。

100 X GTPγS (Catalog No. 30302) ：小管裝—100ul (10 mM) ，實(shí)驗(yàn)中0.5mL細(xì)胞裂解液使用      5ul GTPγS標(biāo)記。

100 X GDP (Catalog No. 30304) ：小管裝—100ul (100 mM) ，實(shí)驗(yàn)中0.5mL細(xì)胞裂解液使用5ul GDP標(biāo)記。