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HPLC對(duì)流動(dòng)相的一般要求
流動(dòng)相就比如人體的血液,其質(zhì)量直接影響到整個(gè)系統(tǒng)的正常運(yùn)行與否。
© 應(yīng)該使用HPLC級(jí)的溶劑,不能互相混溶的溶劑不可以直接切換!
© 注意溶劑的截止波長(zhǎng)。截止波長(zhǎng)是指該溶劑可以在紫外檢測(cè)器中使用的很低波長(zhǎng),低于該波長(zhǎng)后,溶劑會(huì)有很強(qiáng)的紫外吸收,從而影響極限的穩(wěn)定性、干擾對(duì)所分析物質(zhì)的檢測(cè)。
© HPLC所使用的水必須是新鮮的和經(jīng)過(guò)0.45μm濾膜過(guò)濾過(guò)的。建議每天更換新鮮的水。長(zhǎng)期不用時(shí),必須把使用水的管路用有機(jī)的溶劑置換,防止長(zhǎng)霉。
© 儀器使用完后要采用適當(dāng)?shù)娜軇_洗等方法維護(hù)色譜柱和系統(tǒng)。如果使用了緩沖鹽一定先將鹽要沖洗干凈。
© 當(dāng)有流路堵塞時(shí),可以嘗試將之反接后沖洗。污染的溶劑或溶劑瓶里的藻類生長(zhǎng)將會(huì)縮短溶劑過(guò)濾器的使用壽命,并且影響泵和系統(tǒng)的的性能。這在水溶劑或磷酸鹽緩沖液(pH 4 至7) 中尤其如此。
高效液相空白色譜柱出峰的原因?
【分析原因】1.確定檢測(cè)波長(zhǎng),如果是末端吸收,排除三氟乙酸的干擾。
2.使用100%乙腈作為流動(dòng)相,乙腈作為樣品進(jìn)樣,如果為基線,則說(shuō)明色譜柱及系統(tǒng)完好。
3.然后在換流動(dòng)相為10%乙腈和90%三氟乙酸水,樣品為乙腈,如果有上述“中間位置出現(xiàn)較大的色譜峰”,那說(shuō)明八成問(wèn)題在三氟乙酸上,或者稀釋三氟乙酸的水上。
4.如果上述2、3都有“中間位置出現(xiàn)較大的色譜峰”,檢查檢測(cè)器及進(jìn)樣器。
5.這些還不能解決,請(qǐng)聯(lián)系工程師
高效液相色譜儀-色譜峰的雙峰問(wèn)題
長(zhǎng)期使用后的色譜柱,如果有雜質(zhì)進(jìn)入,就會(huì)使色譜柱入口處的固定相“板結(jié)”并在流動(dòng)相所產(chǎn)生的高壓作用下,形成柱頭的塌陷,被分析的樣品組分的正常色譜峰就變成了雙峰,這時(shí)可按下述方法來(lái)修復(fù)色譜柱。首先將柱頭的緊固螺母旋下,這時(shí)就會(huì)發(fā)現(xiàn)柱頭內(nèi)的固定相已被壓縮進(jìn)去了,嚴(yán)重時(shí)可縮進(jìn)10mm以上。在這種情況下,我們可用針尖將流動(dòng)相表層板結(jié)變黃的部分摳掉,并以相同的固定相將此塌陷區(qū)填平、壓實(shí),再將色譜柱的緊固螺絲上緊,修復(fù)工作即告結(jié)束。用經(jīng)過(guò)修復(fù)后的色譜柱再做樣品時(shí),色譜峰就恢復(fù)正常了。
液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?
①篩板堵塞或柱失效,解決辦法是反向沖洗柱子,替換篩板或更換柱子。
②存在干擾峰,解決辦法為使用較長(zhǎng)的柱子,改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子
③可能柱超載,減少進(jìn)樣量。
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