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將濾膜轉(zhuǎn)到200ml預(yù)洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,放到位于培養(yǎng)箱內(nèi)的旋轉(zhuǎn)平臺上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中,應(yīng)緩緩搖動濾膜,防止它們粘在一起。
武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術(shù)研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術(shù)公司;亦可經(jīng)15磅高壓滅菌20min處理,可將載玻片上的核酸酶消除。公司實驗中心有分子生物學(xué)平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。
,雜交后再通過細胞化學(xué)過程連接上熒光染料[1,2].FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯(lián)的單與探針分子特異性結(jié)合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優(yōu)點,不但能顯示中期分裂相,還能顯示于間期核.同時在熒光原位雜交基礎(chǔ)上又發(fā)展了多彩色熒光原位雜交技術(shù)和染色質(zhì)纖維熒光原位雜交技術(shù).
武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術(shù)研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術(shù)公司;對分散在若干個瓊脂平板上的少數(shù)菌落(100-200)進行篩選時,可采用該方法。公司實驗中心有分子生物學(xué)平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。切片及細胞標本的制備
載玻片的處理 因為原位雜交一般在載玻片上進行,所以載玻片必須保持清潔且不能有任何核酸酶的污染。一般載玻片可先經(jīng)洗衣粉浸泡過夜,用流水沖洗、酸中浸泡4~8h,再用流水沖洗,雙蒸水洗2~3次。在160℃烤箱中烘烤2~4h。RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學(xué)或RNA原位雜交。亦可經(jīng)15磅高壓滅菌20min處理,可將載玻片上的核酸酶消除。
武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術(shù)研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術(shù)公司;它主要是利用物種之間DNA同源性的差異,用另一物種的基因組DNA以適當(dāng)?shù)臐舛茸鞣庾?,在靶染色體上進行原位雜交。公司實驗中心有分子生物學(xué)平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。
陰性對照用已知不存在相應(yīng)靶序列的組織標本雜交,結(jié)果應(yīng)為陰性。陰性對照可排除在雜交過程中由于非特異性雜交反應(yīng)等因素造成的假陽性結(jié)果。
陽性對照用已知含靶序列的組織切片與待檢標本同樣處理,結(jié)果應(yīng)為陽性,稱陽性對照。通過陽性對照可證明雜交過程中各個步驟以及所使用的試劑都合乎標準,實驗方法可靠。尤其當(dāng)待檢標本為陰性時,陽性對照片呈陽性反應(yīng)可排除待檢標本假陰性的可能。1)將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復(fù)使用十次左右)。故若預(yù)期雜交結(jié)果為陰性時,就必須設(shè)陽性對照,當(dāng)陽性對照亦不顯色,就證明雜交過程的某一步驟或所用試劑問題。