低溫生物菌種——篩選模型

根據(jù)不同的篩選目的，采用不同的篩選模型。如常規(guī)篩選產(chǎn)生菌的方法是將土壤中分離所得的純種，在含有瓊脂培養(yǎng)基的平皿上培養(yǎng)后，用打孔器將菌塊移至含有試驗菌的瓊脂培養(yǎng)基上，在適宜的溫度下培養(yǎng)一定時間后取出，如在菌塊的周圍有透明的抑菌圈，則表明此菌種具有產(chǎn)生抑制試驗菌生長的抑菌物質(zhì)的能力。所得菌種經(jīng)過搖瓶液體發(fā)酵，選出生產(chǎn)能力高的菌種。另一方面對所提取的進行結(jié)構(gòu)分析、藥理試驗及臨床試驗等，確為有效者，即可作為生產(chǎn)菌種。又如篩選脂肪酶生產(chǎn)菌種的方法是將分離所得的霉菌涂布于含有牛脂的瓊脂培養(yǎng)基上，恒溫培養(yǎng)一定時間，如菌落周圍出現(xiàn)透明圈的，則該菌具有分解脂肪的能力，進一步作搖瓶發(fā)酵測定酶活力，挑選產(chǎn)量高者作生產(chǎn)菌種的出發(fā)菌株。

低溫生物知多少？

實驗室的傳代保藏過程

1. 按說明書要求復(fù)溶菌粉，轉(zhuǎn)種于適當?shù)脑鼍囵B(yǎng)基內(nèi)（G1），復(fù)壯后轉(zhuǎn)接至平板上，并于適當溫度下培養(yǎng)適當時間，分離出單個純種菌落，此為第2代（G2）。

2. 鑒定完成后，挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管，同時挑取純菌落轉(zhuǎn)接斜面作為工作用。此時，保藏為第2代，但工作用則為第三代。

3. 將第2代管冷凍保存，將工作用于適當溫度下培養(yǎng)適當時間后可用于試驗。

4. 取一支冷凍保存的G2代轉(zhuǎn)種于平板和斜面培養(yǎng)基上，平板上的制成冷凍保藏管第三代（G3），斜面培養(yǎng)基經(jīng)適當溫度下培養(yǎng)適當時間后用作工作用（W3）。

5. 將第三代（G3）冷凍或低溫保存，將生長、轉(zhuǎn)種后的G2經(jīng)滅菌處理后丟棄。

6. 當工作用代數(shù)小于5時，可直接用上一代工作用轉(zhuǎn)接下一代工作用，如W3可直接轉(zhuǎn)接為W4。

7. 按上述程序操作，直至G4轉(zhuǎn)為W5為止，需重新開啟安瓿，再重復(fù)上述操作程序、保藏和使用。

以上方法中，被分為兩類。傳代用和工作用，傳代用用于甘油冷凍管法保藏，工作用用斜面低溫保藏法保藏。

實驗證明，甘油冷凍管的有效期至少為2年，但其主要適用于細菌（需氧）、酵母菌的傳代、保藏、真菌和芽孢類細菌則需應(yīng)用其它方法。

低溫生物菌種——常用菌種介紹

側(cè)孢芽孢菌

在延遲期， 短芽孢菌為革蘭氏染色陰性，菌體呈細長的桿狀；在對數(shù)生長期，為革蘭氏染色陽性，菌體成短而粗的桿狀；在靜止期，革蘭氏染色又轉(zhuǎn)為陰性，菌體成細長的桿狀，偶爾也能觀察到橢圓形的芽孢。圖1是50號菌用1%H2SO4(pH6.8)負染后的電鏡照片：菌體桿狀、周生鞭毛、大小約0.88μm×2.2μm。

作為非脊椎動物的病原菌，有關(guān)研究人員曾報道了這種細菌的殺線蟲能力，由于所報道的這些側(cè)孢短芽孢菌菌株都不產(chǎn)生伴孢晶體，所以這些菌株的殺線蟲毒力因子并非來自于具有特征性的伴孢晶體。然而，Smirnova TA，et al.分離到了2株能形成大的伴孢晶體的側(cè)孢短芽孢菌菌株，這兩株菌顯示出很強的殺昆蟲能力，研究證實，這種能力與菌體在形成芽孢過程中的伴孢晶體相關(guān)。有趣的是，Singer的實驗表明，一株側(cè)孢短芽孢菌的殺線活性源于一個熱穩(wěn)定蛋白的毒性。所有這些研究表明，不同側(cè)孢短芽孢菌菌株擁有不同的線蟲致病因子。牛秋紅研究小組分離到的側(cè)孢短芽孢菌G4菌株具有顯著的殺線蟲功能，但其并不產(chǎn)生伴孢晶體。從該菌株的發(fā)酵液里提取的粗蛋白酶液在12h內(nèi)能殺掉所有測試線蟲并在24h內(nèi)完全降解。從側(cè)孢短芽孢菌G4菌株中純化出的絲氨酸胞外蛋白酶可水解多種底物，包括膠原和線蟲體壁，具有很強的殺線蟲能力，組織病理電鏡實驗證實這種蛋白酶嚴重破壞了線蟲體壁。而且，蛋白酶將線蟲體壁分解成為一些氨基酸或小肽，這些營養(yǎng)物使病原細菌更好的生長繁殖。該蛋白酶基因異源表達的菌株表現(xiàn)出了明顯的殺線蟲活性，重組蛋白酶在體外對線蟲體壁降解，而蛋白酶缺失菌株喪失了大部分的殺線活性，死的線蟲在生測中保持了完整的體壁，表明蛋白酶在線蟲侵染中起主要作用。

生物菌種的特點

調(diào)節(jié)生命活動，增產(chǎn)增收：菌群中的膠凍樣芽孢菌、側(cè)孢芽孢菌、地衣芽孢菌等有益菌可促進作物根系生長，須根增多。有益微生物菌群代謝產(chǎn)生的植物內(nèi)源酶和植物生長調(diào)節(jié)劑經(jīng)由根系進入植物體內(nèi)，促進葉片光合作用，調(diào)節(jié)營養(yǎng)元素往果實流動，膨果增產(chǎn)效果明顯。與施用化肥相比，在等價投入的情況下可增產(chǎn)15%—30%。