反相色譜影響因素(1)柱長有機(jī)小分子和肽類的分辨率隨柱長的增加而增加．但是柱長增加并不能使蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的分辨率顯著增加．它們在較短的柱子上往往也有很好的分離效果。(2)流動相的流速。有機(jī)小分子和肽類的分辨率對流動相流速非常敏感。而蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的分辨率則不然。流速越小，柱子越長，色譜峰的寬度就越大，分辨率就越小。水是極性強(qiáng)的溶劑，在反相色譜中常常和基礎(chǔ)溶劑配合使用，向流動相中加入不同濃度的、可以與水混溶的有機(jī)溶1劑，以得到不同強(qiáng)度的流動相，這些有機(jī)溶1劑稱為修飾劑。制備色譜上樣過程中的流速對動態(tài)吸附容量影響很大。(3)溫度。溫度上升，流動相黏度下降，流動速度加快，且流動相與固定相之間的傳質(zhì)速度加快，使分辨率增加。同時，溫度上升，分子熱運(yùn)動增加，疏水性作用減弱。升高溫度要考慮目標(biāo)物質(zhì)的熱穩(wěn)定性。(4)流動相組成。流動相的極性越大，溶質(zhì)的分配系數(shù)越大，洗脫時間越長。RPC多采用降低流動相極性(水含量)的線性梯度洗脫法。水是極性強(qiáng)的溶劑，在反相色譜中常常和基礎(chǔ)溶劑配合使用，向流動相中加入不同濃度的、可以與水混溶的有機(jī)溶1劑，以得到不同強(qiáng)度的流動相，這些有機(jī)溶1劑稱為修飾劑。反相色譜中的有機(jī)溶1劑。此外，乙醇、四氫呋1喃、異丙1醇及二氧六環(huán)也常被用作修飾劑。有機(jī)溶1劑梯度的大小也會影響分辨率，一般梯度越小，分辨率越大。

分析性色譜的目的是定量或者定性測定混合物中各組分的性質(zhì)和含量。但是并不是說一定要馬上更換，還可以從實(shí)際實(shí)驗效果看能否湊合使用。定性的分析性色譜有薄層色譜、紙色譜等，定量的分析性色譜有氣相色譜、液相色譜等。色譜法應(yīng)用于分析領(lǐng)域使得分離和測定的過程合二為一，降低了混合物分析的難度縮短了分析的周期，是比較主流的分析方法。在中華人民共和國藥典中，有超過約600種化學(xué)合成藥和超過約400種中藥的質(zhì)量控制應(yīng)用了液相色譜的方法。

使用儀器不當(dāng)：只要互相有10%比例就不會出現(xiàn)這個問題。另一原因是在用緩沖液鹽溶液（不論甲1醇含量有多少）作流動相時，實(shí)驗結(jié)束后沒有換甲1醇水沖洗，使得微滲的流動相干燥形成晶體造成。漏液：液相色譜儀從流動相瓶到廢液瓶之間的流路是一個全封閉體系，內(nèi)部壓力很高，但外部卻能保證一滴不漏。不過，輸送泵漏液并不是非得馬上修不可，沖洗干凈并在以后的使用中多加小心一般都可以正常使用。檢測器漏液是個很麻煩的事，一般都是吸收池的問題，更換的費(fèi)用相當(dāng)高。但是并不是說一定要馬上更換，還可以從實(shí)際實(shí)驗效果看能否湊合使用。