低溫生物菌種的保存方法

低溫保存法

①簡(jiǎn)單保存法，將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過(guò)1～2個(gè)月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時(shí)間可達(dá)3～4個(gè)月；

②液氮超低溫保存法，將生長(zhǎng)穩(wěn)定期的細(xì)胞懸浮在10%甘油或其他低冰點(diǎn)液體中，密封于安瓿管內(nèi)，然后控制冷卻速度，使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時(shí)，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多數(shù)微生物如病毒、噬菌體、多種細(xì)菌、酵母和原蟲(chóng)、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物，都可用此法長(zhǎng)期保存。

低溫生物菌種——常用菌種介紹

側(cè)孢芽孢菌

在延遲期， 短芽孢菌為革蘭氏染色陰性，菌體呈細(xì)長(zhǎng)的桿狀；在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，為革蘭氏染色陽(yáng)性，菌體成短而粗的桿狀；在靜止期，革蘭氏染色又轉(zhuǎn)為陰性，菌體成細(xì)長(zhǎng)的桿狀，偶爾也能觀察到橢圓形的芽孢。圖1是50號(hào)菌用1%H2SO4(pH6.8)負(fù)染后的電鏡照片：菌體桿狀、周生鞭毛、大小約0.88μm×2.2μm。

作為非脊椎動(dòng)物的病原菌，有關(guān)研究人員曾報(bào)道了這種細(xì)菌的殺線蟲(chóng)能力，由于所報(bào)道的這些側(cè)孢短芽孢菌菌株都不產(chǎn)生伴孢晶體，所以這些菌株的殺線蟲(chóng)毒力因子并非來(lái)自于具有特征性的伴孢晶體。然而，Smirnova TA，et al.分離到了2株能形成大的伴孢晶體的側(cè)孢短芽孢菌菌株，這兩株菌顯示出很強(qiáng)的殺昆蟲(chóng)能力，研究證實(shí)，這種能力與菌體在形成芽孢過(guò)程中的伴孢晶體相關(guān)。有趣的是，Singer的實(shí)驗(yàn)表明，一株側(cè)孢短芽孢菌的殺線活性源于一個(gè)熱穩(wěn)定蛋白的毒性。所有這些研究表明，不同側(cè)孢短芽孢菌菌株擁有不同的線蟲(chóng)致病因子。牛秋紅研究小組分離到的側(cè)孢短芽孢菌G4菌株具有顯著的殺線蟲(chóng)功能，但其并不產(chǎn)生伴孢晶體。從該菌株的發(fā)酵液里提取的粗蛋白酶液在12h內(nèi)能殺掉所有測(cè)試線蟲(chóng)并在24h內(nèi)完全降解。從側(cè)孢短芽孢菌G4菌株中純化出的絲氨酸胞外蛋白酶可水解多種底物，包括膠原和線蟲(chóng)體壁，具有很強(qiáng)的殺線蟲(chóng)能力，組織病理電鏡實(shí)驗(yàn)證實(shí)這種蛋白酶嚴(yán)重破壞了線蟲(chóng)體壁。而且，蛋白酶將線蟲(chóng)體壁分解成為一些氨基酸或小肽，這些營(yíng)養(yǎng)物使病原細(xì)菌更好的生長(zhǎng)繁殖。該蛋白酶基因異源表達(dá)的菌株表現(xiàn)出了明顯的殺線蟲(chóng)活性，重組蛋白酶在體外對(duì)線蟲(chóng)體壁降解，而蛋白酶缺失菌株喪失了大部分的殺線活性，死的線蟲(chóng)在生測(cè)中保持了完整的體壁，表明蛋白酶在線蟲(chóng)侵染中起主要作用。

生物菌種的特點(diǎn)

果實(shí)品質(zhì)明顯提高：菌群中的側(cè)孢芽孢菌、枯草芽孢菌、凝結(jié)芽孢菌等可降低植物體內(nèi)酸鹽含量20%以上，能降低重金屬含量，可使果實(shí)中Vc含量提高30%以上，可溶性糖提高2—4度。乳酸菌、嗜酸乳菌、凝結(jié)芽孢菌、枯草芽孢菌等可提高果實(shí)中必需氨基酸(賴(lài)氨酸和蛋氨酸)、維生素B族和不飽和脂肪酸等的含量。果實(shí)口感好，耐儲(chǔ)藏。