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在Tris的使用中,需要注意:Tris緩沖液的pH值受溫度和濃度影響很大,因此在配制過程中要考慮使用環(huán)境。且來看看它在Bis-Tris, Tricine,TES,TAPS中如何發(fā)揮它的潛能的。因為Tris堿的堿性較強,所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液;對生物化學過程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。需要注意的是THAM緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1,而且易吸收CO2所以需要密封。THAM主要就是用于生物緩沖劑的,與用于的緩血酸胺有差異,需要加以區(qū)別。
提到緩沖液就不得不延伸一下,這就是Henderson-Hasselbalch方程。
在前面提到,
將等式同時取對數,并簡化就可以得到:
或者
這就是Henderson-Hasselbalch方程。
注意:式子中酸及其共軛堿的濃度都是平衡時的濃度,除了酸性過于強的情況下,由于同離子效應的存在,一般都可用此式計算。
使用時確保柱材料能夠與這些還原劑相容。例如,高濃度的還原劑會脫掉鎳柱中的鎳,并使柱子顏色變深呈棕色(這個時候就可以考慮武漢匯研生物科技股份有限公司(www.huiyan-bio.com)的高耐受鎳柱 匯研生物 Ni Focurose 6FF(TED),匯研TED鎳填料可以耐受10mM的還原劑和100mM的EDTA)聯(lián)系W/Q:514099167,雖然柱子很容易進行再生,但你的蛋白掛載量將會受到很大影響。許多柱材料都會列出其所能夠承受還原劑的濃度,但是我覺得或多或少都會產生影響,并不在于是否達到濃度值。
常用貯液與溶液
1mol/L亞精胺(Spermidine): 溶解2.55g亞精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):將77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔徑的濾膜過濾。