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廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測(cè)、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測(cè)、非洲檢測(cè)、全自動(dòng)核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測(cè)試劑盒。我們的客戶對(duì)象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場(chǎng)、養(yǎng)豬場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、生豬屠宰場(chǎng)。專門的熱循環(huán)儀配備熒光檢測(cè)模塊,用于監(jiān)測(cè)擴(kuò)增時(shí)的熒光,檢測(cè)到的熒光信號(hào)反映了每個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物的量。
廣州勱博--冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠熒光定量PCR
豬肉制品加工企業(yè)、生豬產(chǎn)品經(jīng)營(yíng)者采購(gòu)生豬產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)批批查驗(yàn)其動(dòng)物檢疫合格證明、肉品品質(zhì)檢驗(yàn)合格證明以及非洲病毒檢測(cè)結(jié)果(報(bào)告),確保購(gòu)進(jìn)的生豬產(chǎn)品不帶非洲病毒;采購(gòu)的進(jìn)口生豬產(chǎn)品應(yīng)附有合法的入境貨物檢驗(yàn)檢疫合格證明。不得采購(gòu)沒有非洲病毒檢測(cè)結(jié)果(報(bào)告)及未經(jīng)檢疫或者檢疫不合格的生豬產(chǎn)品,確保豬肉制品和經(jīng)營(yíng)的生豬產(chǎn)品不含非洲病毒。如采用常規(guī)的終點(diǎn)檢測(cè)法(利用EB染色來判斷擴(kuò)增產(chǎn)物的多少,從而間接的判斷起始拷貝量),即使起始模板量相同經(jīng)PCR擴(kuò)增、EB染色后也完全有可能得到不同的終點(diǎn)熒光信號(hào)強(qiáng)度。
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所謂real-time Q-PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在real-time 技術(shù)的發(fā)展過程中,兩個(gè)重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用:(1)在90年代早期,Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn),它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測(cè)PCR產(chǎn)物成為可能。(2)此后熒光雙標(biāo)記探針的運(yùn)用使在一密閉的反應(yīng)管中能實(shí)時(shí)地監(jiān)測(cè)反應(yīng)全過程。相比其他環(huán)節(jié),在生豬屠宰廠(場(chǎng))開展檢測(cè)更容易采集樣品,實(shí)現(xiàn)最i大限度的檢測(cè)覆蓋面,結(jié)合臨床和剖檢情況綜合判斷。這兩個(gè)發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運(yùn)用。
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熒光定量PCR樣品RNA的抽提①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯i仿,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯i仿相,中間層以及無(wú)色水相上層。目前在real-timeQ-PCR中最廣泛使用的TaqMan系統(tǒng)就是運(yùn)用了這個(gè)原理。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
廣州勱博--養(yǎng)豬場(chǎng)檢測(cè)
近年來,分子遺傳學(xué)診斷技術(shù)發(fā)展迅速,熒光定量PCR(QF-PCR)技術(shù)、熒光原位雜交(FISH)技術(shù)、多重連接探針擴(kuò)增(MLPA)技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)、染色體微陣列分析(CMA)技術(shù)、產(chǎn)前液相芯片(BoBs)技術(shù)、無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前基因檢測(cè)(NIPT)等已逐漸成熟,并開始向臨床轉(zhuǎn)化。分子遺傳學(xué)診斷技術(shù)多以遺傳物質(zhì)DNA為檢測(cè)對(duì)象,不需要進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),為傳統(tǒng)的細(xì)胞染色體核型分析技術(shù)提供了有效的補(bǔ)充。廣州勱博--屠宰場(chǎng)核酸提取純化一般情況下,高溫消毒時(shí),60℃就可以將多數(shù)病原殺滅,但汽i油噴燈溫度達(dá)幾百度,噴燈火焰一掃而過,也不會(huì)殺滅病原,因時(shí)間太短。
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廣州勱博--養(yǎng)殖場(chǎng)熒光定量PCR
相對(duì)常規(guī)PCR而言,熒光定量PCR的主要優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)確地確定初始模板拷貝數(shù)和寬的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)和高的靈敏度。熒光定量PCR結(jié)果可以用于定性(判斷一段序列的有無(wú)),也可以用于定量(確定DNA拷貝數(shù)),即qPCR,而常規(guī)PCR只能做半定量。另外,熒光定量PCR的結(jié)果無(wú)需通過瓊脂糖凝膠電泳來評(píng)估,大大節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間,提高實(shí)驗(yàn)效率。但磁珠法由于磁珠吸附DNA分子的不均衡、且在后續(xù)洗脫過程中會(huì)造成核酸的斷裂和損失,因此在疑難檢材的檢驗(yàn)過程中,存在PCR擴(kuò)增失敗,DNA檢驗(yàn)不成功的情況。還有,由于PCR反應(yīng)和檢測(cè)都在反應(yīng)管中進(jìn)行,樣品污染的幾率大大降低,無(wú)需擴(kuò)增后的實(shí)驗(yàn)操作。
廣州勱博--冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠檢測(cè)
簡(jiǎn)單的講PCR技術(shù)早是用于擴(kuò)增一段特異的PCR片段,用于克i隆、測(cè)序等實(shí)驗(yàn),后來也將其用于樣本中特異的PCR片段有無(wú)或相對(duì)定量,而熒光定量PCR技術(shù)則是為了測(cè)定樣本中特異的PCR片段相對(duì)或絕i對(duì)量,是一種測(cè)定特異的PCR片段含量的方式。如測(cè)定病i人樣本中病原體的含量、實(shí)驗(yàn)樣本中某一特定的mRNA的含量等。因?yàn)椴≡w往往附著于其他物質(zhì)上面或中間,消毒i藥與病原接觸需要先滲透,而滲透則需要時(shí)間,有時(shí)時(shí)間會(huì)很長(zhǎng)。有人講過普通PCR后,通過電泳也可以進(jìn)行定量,其實(shí)是將PCR產(chǎn)物的定量與PCR樣本中模板定量相混了。
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廣州勱博--養(yǎng)殖場(chǎng)病毒核酸提取系統(tǒng)
核酸的提取和純化是法醫(yī)DNA物證檢驗(yàn)的關(guān)鍵技術(shù)之一,目前實(shí)驗(yàn)室i常用的方法包括核酸純化柱(Spin column)磁珠法和clean-up系統(tǒng),磁珠法由于操作簡(jiǎn)便、快速,能夠提取到高純度的核酸DNA,并且可以自動(dòng)化,因此成為目前法醫(yī)DNA實(shí)驗(yàn)室核酸提取純化的主要手段。但磁珠法由于磁珠吸附DNA分子的不均衡、且在后續(xù)洗脫過程中會(huì)造成核酸的斷裂和損失,因此在疑難檢材的檢驗(yàn)過程中,存在PCR擴(kuò)增失敗, DNA檢驗(yàn)不成功的情況。一般用于mRNA轉(zhuǎn)錄水平的定量研究、不同樣本或基因組中DNA拷貝數(shù)的測(cè)定、基因芯片結(jié)果驗(yàn)證、藥i效分析等。
廣州勱博--食品企業(yè)/公司/廠核酸提取純化
對(duì)豬場(chǎng)實(shí)行非瘟檢測(cè),并不是說要每天/每次都要進(jìn)行檢測(cè),而是基于豬場(chǎng)各區(qū)域/途徑的風(fēng)險(xiǎn)程度制定合適的檢測(cè)頻率,高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域檢測(cè)頻率相對(duì)而言要高些,如引種/車輛/精i液,建議每次采樣檢測(cè),采購(gòu)飼料/物資產(chǎn)品,建議先試用并隔離做檢測(cè),其余定期監(jiān)測(cè),檢測(cè)頻率可按每月或每周進(jìn)行,具體可根據(jù)本場(chǎng)實(shí)際情況而定,可按照?qǐng)鰞?nèi)所劃分的管理單元格進(jìn)行全i方位的篩選,從而降低疾病傳入風(fēng)險(xiǎn)。(3)目前real-timeQ-PCR實(shí)驗(yàn)成本比較高,從而也限制了其廣泛的應(yīng)用。