組成編輯完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:(1)已包被抗原或的固相載體(吸附劑);(2)酶標(biāo)記的抗原或(結(jié)合物);(3)酶的底物;(4)陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制(定量測(cè)定中);(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;(6)洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;(7)酶反應(yīng)終止液,常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液的終體積而異,在板式ELISA中一般采用3mol/L。
然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過(guò)氧化物酶)酶結(jié)合物,經(jīng)第二次孵育后,酶結(jié)合物就會(huì)與次孵育結(jié)合上的HEV IgM相結(jié)合,洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng),只有那些含有HEV IgM和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng)

常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。(2) 包被(或抗原)的選擇:將(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時(shí)。

此外, 白介素6在多種炎性疾病和自身疾病發(fā)揮重要的作用. 此試劑盒能高靈敏度的檢測(cè)小鼠和細(xì)胞基質(zhì)上清的白介素6 原理 此試劑盒運(yùn)用了兩種特異性,洗板后加入TMB底物液顯色,顯色的強(qiáng)度與小鼠的白介素-6的量成正比. 檢測(cè)范圍 10.94的 700 pg/mL 預(yù)期用途
一、ELISA實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性,誤差不能超過(guò)2%??捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確定。但有人員進(jìn)行矯正。2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定。