細(xì)胞復(fù)蘇凍存袋

1. 從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化。

2. 從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細(xì)胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液，混勻；

3. 離心， 1000rpm，5min；

4. 棄去上清液，加入含10%小牛血培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度，接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

5. 次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存步驟

1.用移液器吸走原培養(yǎng)基，加入適量PBS洗1-2遍;

2.加入適量胰酶，置于培養(yǎng)箱中消化;

3.待消化到位后加入適量血漿或完全培養(yǎng)基終止消化，800-1000rpm離心3-5min;

4.配制凍存液，待細(xì)胞離心后去上清，加入凍存液重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106~1×107 cells/mL，轉(zhuǎn)移到凍存管中;

5.將凍存管放入程序降溫盒中，-80度過夜，然后轉(zhuǎn)移到液氮中保存。

6.凍存細(xì)胞后應(yīng)取出一管復(fù)蘇，檢測(cè)細(xì)胞的存活率。理論上細(xì)胞可在液氮內(nèi)長(zhǎng)期保存，

為穩(wěn)妥起見可在細(xì)胞凍存半年后復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，再繼續(xù)凍存

凍存袋的應(yīng)用

對(duì)于需要保存5年以上的體外細(xì)胞的方法,-196°℃的深低溫液氮保存簡(jiǎn)便,實(shí)用.凍存后的細(xì)胞損傷小活力高能保障患者移植后造血功能的早期恢復(fù),反之則導(dǎo)致造血功能恢復(fù)的延遲甚至失敗.原有的液氮罐保存方式是將裝有千細(xì)胞的凍存袋放入圓筒狀的容器中后,再放入液氮罐中保存,由于凍存袋與圓筒狀的容器形狀尺寸的不匹配冷凍保存時(shí)會(huì)造成凍存袋的變形導(dǎo)致千細(xì)胞被擠壓受損甚至消滅,且受液氮罐空間限制能凍存的數(shù)量有限.針對(duì)如何經(jīng)濟(jì),較大容量的保存細(xì)胞.