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坡度洗脫的流動(dòng)相選擇不當(dāng)要注意溶劑的溶解性，不相容性溶劑不能作為梯度洗脫的流動(dòng)相。部分溶劑混溶于一定比例，超過(guò)一定范圍后就不能互溶，使用時(shí)更要注意。同時(shí)，在與緩沖溶液混合時(shí)，也會(huì)發(fā)生與緩沖劑混合，在使用過(guò)程中需要特別注意。不計(jì)空白梯度洗脫為保證良好的重復(fù)性，梯度洗脫的溶劑純度要求較高。由于弱溶劑中的雜質(zhì)在色譜柱上被強(qiáng)溶劑洗脫，在分析樣品之前，必須對(duì)樣品進(jìn)行空白梯度洗脫，識(shí)別溶劑雜質(zhì)峰。分級(jí)洗脫溶劑需要完全脫氣，以防止在混合過(guò)程中產(chǎn)生氣泡。沒(méi)有考慮溶劑混合引起的粘度變化由于混合溶劑的粘度隨組分而變化，因此，在梯度洗脫過(guò)程中常常會(huì)發(fā)生壓力變化。比如，和水的粘度都比較小，當(dāng)它們以相似比例混合時(shí)，粘度增加很大，這時(shí)的柱壓比或水為流動(dòng)相時(shí)大一倍。所以在梯度洗脫時(shí)要注意防止壓力超過(guò)輸液泵或色譜柱可以承受的大壓力。

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六通閥的正確使用與維護(hù)①樣品進(jìn)樣前，要用0.45μ的濾膜過(guò)濾，以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。②旋轉(zhuǎn)閥芯時(shí)不要太慢，不要停留在中間位置，否則流動(dòng)相受阻，使泵內(nèi)壓力急劇上升，甚至超過(guò)了泵的大壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位置，過(guò)高的壓力會(huì)使柱頭損壞。③為了防止進(jìn)樣閥內(nèi)的緩沖鹽及樣品殘留，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。一般可采用清水沖洗，或先用溶樣溶劑沖洗，再用清水沖洗。

用不同的方法對(duì)色譜柱會(huì)有不同的要求，但是每一種色譜柱都有其清潔要求，這在色譜柱上可以找到，必須按照以上的要求來(lái)進(jìn)行，否則會(huì)導(dǎo)致色譜柱效下降，色譜柱的使用壽命縮短，檢測(cè)波長(zhǎng)會(huì)因品種的不同而有不同的要求，這里需要指出的是要注意觀察檢測(cè)器燈能量的變化，如基線波動(dòng)大，活性成分的響應(yīng)值突然變小等，對(duì)檢測(cè)器電鏡能量的變化，要注意觀察到檢測(cè)器中能量的變化，如基線波動(dòng)大，活性成分的響應(yīng)值突然變小等，有可能是由于燈的能量不足導(dǎo)致的，所以實(shí)際使用時(shí)要根據(jù)實(shí)際情況更換。流動(dòng)速度也因品種而異，一般為1.0 ml/min，流速不能隨意改變，尤其作為 QC人員，但作為研發(fā)人員，有時(shí)為了摸索條件或進(jìn)行方法耐用性驗(yàn)證，會(huì)改變流速來(lái)評(píng)估該方法的適用性。對(duì)不同品種的進(jìn)樣量也有不同的規(guī)定，進(jìn)樣量這個(gè)現(xiàn)在都是自動(dòng)進(jìn)樣，所以進(jìn)樣精密度都是很好的，不用特別強(qiáng)調(diào)。

操作員：，作為液相操作人員，必須認(rèn)真學(xué)習(xí)夜想說(shuō)明書，掌握液相硬件和軟件的操作，掌握日常維護(hù)，掌握基本故障的排除與維修。普通液相的操作規(guī)程也是由操作人員起草的，因此只要嚴(yán)格按照操作要求操作，一般都不會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題，當(dāng)然對(duì)液相的日常維護(hù)維護(hù)來(lái)說(shuō)，特別是對(duì)液相的日常維護(hù)保養(yǎng)來(lái)說(shuō)，要注意的是液相的日常維護(hù)保養(yǎng)，泵密封墊的清洗、系統(tǒng)的清洗、溶劑過(guò)濾頭的清洗等方面都不會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題，尤其是對(duì)液相的日常維護(hù)，不會(huì)造成不必要的麻煩。第二，操作者在配制液相分析樣品時(shí)，好由同一人單獨(dú)完成，以免不必要的意外誤差。4、液體安裝環(huán)境：儀表應(yīng)盡量安裝在水平位置，遠(yuǎn)離振動(dòng)、電磁干擾的屋內(nèi)，有條件時(shí)盡量把液相數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分開(kāi)，一方面是防止色譜基線噪聲太大、基線不穩(wěn)等，一方面是為了減少對(duì)人體的危害。

先要認(rèn)識(shí)到，一般國(guó)產(chǎn)其實(shí)不需要額外的過(guò)濾處理，直接使用是沒(méi)有問(wèn)題的。甚至某些固體顆粒雜質(zhì)，都可以從液相流路系統(tǒng)前端的過(guò)濾頭中排除。真正容易出現(xiàn)問(wèn)題的是水中的細(xì)菌。新制純水在室內(nèi)放置數(shù)天后會(huì)產(chǎn)生細(xì)菌，而這些細(xì)菌雖然肉眼看不到，卻足以堵塞柱狀填料顆粒的空隙，導(dǎo)致柱子迅速報(bào)廢。

色譜儀是一種易學(xué)難用的儀器，尤其注重儀器的正確使用。流體工作者接觸到流動(dòng)相，流動(dòng)相是引起液相色譜各種問(wèn)題的主要來(lái)源。液相色譜儀常見(jiàn)的故障有堵塞和漏漏。以下對(duì)這兩點(diǎn)分別展開(kāi)討論。(注：流動(dòng)相以為例，色譜柱以C18為例)“堵”的現(xiàn)象是柱壓異常升高，直接原因是流路不暢。造成“堵塞”的原因：流動(dòng)相中的細(xì)菌污染。阻塞主要發(fā)生在色譜柱前端，流動(dòng)相中存在雜質(zhì)，細(xì)菌是雜質(zhì)的主要來(lái)源。長(zhǎng)時(shí)間，濾頭粘附細(xì)菌，造成泵液不能正常工作這一問(wèn)題的解決辦法就是保證水的可靠性。以下是兩種建議方法：(1)好購(gòu)買實(shí)驗(yàn)室純水機(jī)，既方便又可靠，質(zhì)量也放心。的缺點(diǎn)是價(jià)格昂貴。(2)成箱購(gòu)買市售品牌純凈水，如怡寶或娃哈哈500 ml，這些水的質(zhì)量足以滿足液相色譜的要求。有一個(gè)細(xì)節(jié)值得注意：在絕大多數(shù)書籍中，凡談到配制流動(dòng)相到都要進(jìn)行過(guò)濾的步驟。