廣州碩譜生物科技有限公司，反相SPE柱，是目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)SPE小柱較好的生產(chǎn)廠家。聚合物SPE批發(fā)

對(duì)正相體系，先對(duì)目標(biāo)化合物的正己烷溶液進(jìn)行上樣，然后用5%、10%、20%、30%、40%、60%、70%、80%、90%和的正己烷溶液對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行洗脫，分別收集洗脫液的分析結(jié)果，建立淋洗曲線，確定目標(biāo)化合物洗脫后的溶劑體系，淋洗后的甲1基叔丁基1醚含量應(yīng)略低于目標(biāo)化合物恰好被洗脫時(shí)的溶劑體系，而洗脫液中甲1基叔丁基1醚的含量應(yīng)略高于目標(biāo)化合物正好被洗脫時(shí)的溶劑體系。

合理處理 SPE柱，在 SPE柱中，吸附劑可能存在少量干擾物，有效活化可避免干擾物進(jìn)入洗脫液中，活化溶液應(yīng)選擇整個(gè)洗脫過(guò)程中洗脫強(qiáng)度zui高的溶劑體系。

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樣本制備問(wèn)題

大部分流速問(wèn)題是由于樣品制備不當(dāng)造成的。例如樣品混濁、離心過(guò)濾不充分造成上樣時(shí)篩板堵塞，或樣品本身的蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)處理不當(dāng)，造成有效蛋白沉降，造成篩板堵塞。通過(guò)改進(jìn)前處理方法，可解決由這種原因引起的流速問(wèn)題。因此，樣品準(zhǔn)備是保證 SPE正常流動(dòng)速度的di一步。

小柱子本身因素(填充尺寸和柱子體積)

充填粒徑的作用，大充填粒徑的充填越疏松，流動(dòng)相阻力越小，流速越快；小充填粒徑的作用，充填越緊，流速越慢。這一現(xiàn)象在弗羅里硅土和硅藻土小柱中都很明顯。小柱粒徑范圍一般為40-60 um，農(nóng)殘級(jí)弗羅里硅土的粒徑范圍為75-150 um，大柱粒徑范圍為600-900 um。因此弗羅里硅土和硅藻土小柱的流速會(huì)比一般小柱要快，特別是大孔硅藻土小柱，在使用時(shí)需要配以導(dǎo)流針來(lái)控制流速。

SPE小柱相極固定比流動(dòng)相極性大的分離模式稱為正相模式。主要用途：

固相萃取材料極性表面與物極性官能團(tuán)極性相互作用；極性力比非極性力強(qiáng)，但比離子力弱；常用的極性基團(tuán)有羥基，胺基，巰基等。弱極化基質(zhì)環(huán)境有利于形成極性力，因?yàn)槿鯓O化溶劑不能與極性固定相形成氫鍵功能團(tuán)。結(jié)果表明： SPE正相萃取后，樣品基質(zhì)多為弱極性，如正己烷、二氯甲i烷、菜油等，而目標(biāo)物多含有極性官能團(tuán)。常用極性固定相包括：硅膠、氧化鋁、弗羅里硅土和含有氰基(CN)、氨基(NH2)、二醇基(2 OH)的粘接硅膠。

GP-C18通用反相色譜柱特點(diǎn)：

利用高可控性的單分子層形成技術(shù)和封尾技術(shù)

*柱間重現(xiàn)率高

*選擇性和分離效i率高

適宜于分離酸性i、中性和堿性化合物，以及多種藥i物和多肽等

建議使用有i機(jī)溶劑或有i機(jī)溶劑/水系統(tǒng)的流動(dòng)相。

反相萃取分離主要是利用固相萃取材料官能團(tuán)與目標(biāo)化合物碳?xì)滏I之間的非極性作用力。反相非極性的 SPE柱通常更適合從極性基質(zhì)中提取分離出非極性和中等極性的目標(biāo)化合物。對(duì)利用非極性作用力吸附于非極性 SPE柱的目標(biāo)化合物，可用氯i仿、環(huán)i己烷、乙i酸乙i酯等具有非極性的溶劑洗脫。當(dāng)溶劑的洗脫強(qiáng)度足夠大，可以使目標(biāo)化合物與吸附劑非極性基團(tuán)間的范德華力不受影響時(shí)，使其在 SPE柱中順利洗脫。即使是極性更強(qiáng)的甲i醇，對(duì)許多化合物而言，也有足夠的非極性力量來(lái)洗脫它。有時(shí)候，單種溶劑無(wú)法完全洗脫疏水性的目標(biāo)化合物，可以考慮使用二氯甲i烷：乙i酸乙i酯(1:1，體積比)。

對(duì)典型的硅膠基質(zhì)鍵合反相柱體，在不使用緩沖液的情況下，建議采用下列清洗溶劑系列：甲i醇---乙晴---75%乙晴/25%異丙i醇---異丙i醇---二氯甲i烷---己烷；每種溶劑至少?zèng)_洗10個(gè)柱體，分析柱的洗滌流速為250 mm×4.6 mm。zui終以10柱體積異丙i醇過(guò)渡，然后返回到原始流動(dòng)相(不含緩沖鹽)，zui后返回到初始流動(dòng)相配置。如使用紫外檢測(cè)器，則應(yīng)避免選擇在紫外區(qū)域有吸收作用的溶劑，否則需要使用大量的溶劑沖洗基線，以使基線穩(wěn)定。四氫呋i喃也是常用的清潔溶劑。如懷疑柱子受到嚴(yán)重污染，也可用二甲亞砜(DMSO)或二甲i基胺與水按50:50的比例混合，用流速低于0.5 ml/min的水沖洗色譜柱。