水中糞大腸菌群的常見(jiàn)檢測(cè)方法

1、聚合酶鏈?zhǔn)郊夹g(shù)

提取糞大腸菌群混懸液和待測(cè)水樣的DNA，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增編碼約260bp的LacZ基因（β-半乳糖苷酶基因）和約150BP的UdiA基因（β-D-半乳糖苷酶基因）的DNA，分別檢測(cè)大腸菌群數(shù)和大腸桿菌。

2、熒光原位雜交技術(shù)

由于糞大腸菌群特異的DNA序列，借助熒光標(biāo)記的特異寡聚核苷酸片段作為的探針與待測(cè)水樣中的DNA分子雜交，將雜交細(xì)胞經(jīng)熒光檢測(cè)體系在鏡下對(duì)待測(cè)DNA進(jìn)行定性、定量分析，確定菌群數(shù)。

酶底物法檢測(cè)總大腸菌群操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)時(shí)間短，結(jié)果可靠，無(wú)需確認(rèn)試驗(yàn)，且可以同時(shí)檢測(cè)水中大腸埃希氏菌的污染狀況，能夠較準(zhǔn)確地判斷水樣的微生物污染狀況.

酶底物法檢測(cè)總大腸菌群結(jié)論

①酶底物法檢測(cè)總大腸菌群和大腸埃希氏菌不受實(shí)驗(yàn)環(huán)境是否無(wú)菌的影響。

②此方法對(duì)總大腸菌群和大腸埃希氏菌的檢測(cè)培養(yǎng)溫度需嚴(yán)格控制在35～37 ℃ 間， 溫度過(guò)高或者過(guò)低都會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。

③此方法對(duì)總大腸菌群的檢測(cè)培養(yǎng)時(shí)間在 22～ 28 h 之間可以得到準(zhǔn)確結(jié)果， 而大腸埃希氏菌的檢測(cè)則需 24～28 h;

④無(wú)論振蕩培養(yǎng)或者靜置培養(yǎng)對(duì)培養(yǎng)結(jié)果基本沒(méi)有影響。

酶底物（英語(yǔ)：substrate）在生物化學(xué)領(lǐng)域指參與生化反應(yīng)的物質(zhì)，可為化學(xué)元素、分子或化合物，經(jīng)酶作用可形成產(chǎn)物，一個(gè)生化反應(yīng)的底物往往同時(shí)也是另一個(gè)化學(xué)反應(yīng)的產(chǎn)物。

酶底物法采用 onPG 和 MUG 兩種營(yíng)養(yǎng)指示劑，這兩種試劑分別可以被大腸菌群的 β-半乳糖苷酶和大腸桿菌的 β-葡糖醛酸酶分解代謝。當(dāng)大腸菌群在酶底物檢測(cè)試劑中生長(zhǎng)時(shí)，其使用 β-半乳糖苷酶分解代謝 ONPG，并使樣品從無(wú)色變?yōu)辄S色。大腸桿菌使用 β-葡糖醛酸酶分解代謝 MUG 時(shí)，能夠發(fā)出熒光。

Quanti-tray程控定量封口機(jī)配合51孔定量盤或97孔定量盤提供簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的定量檢測(cè)總大腸菌群、大腸埃希氏菌、糞（耐熱）大腸菌群、腸球菌和綠膿假單胞菌的實(shí)驗(yàn)方案。愛(ài)德士51孔定量盤?和97孔定量盤?是基于傳統(tǒng)方法較大可能數(shù) (MPN) 統(tǒng)計(jì)模型而設(shè)計(jì)的半自動(dòng)定量方法。

1、產(chǎn)品特點(diǎn)：

1）通過(guò)Quanti-tray程控定量封口機(jī)自動(dòng)將樣品／試劑混合液分配到獨(dú)立的孔中。

2）培養(yǎng)結(jié)束后，陽(yáng)性孔數(shù)可以轉(zhuǎn)化為 MPN 值。

3）51孔定量盤可檢測(cè)每 100 mL 水樣中 1-200 MPN 值。

4）97孔定量盤可檢測(cè)每 100 mL 水樣中 1-2,419 MPN 值。

5）整個(gè)檢測(cè)過(guò)程手工操作時(shí)間小于 1 分鐘。