低溫生物菌種的實(shí)驗(yàn)器材

細(xì)菌、酵母菌，霉菌。肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基，滅菌脫脂牛乳，滅菌水，化學(xué)純的液體石蠟，甘油，河沙，瘦黃土或紅土、鹽，干冰，95%酒精，10%鹽酸，無水氯化鈣。滅菌吸管，滅菌滴管，滅菌培養(yǎng)皿，管形安瓿管，淚滴形安瓿管（長頸球形底），40目與 100目篩子，油紙，濾紙條（0.5×1.2cm），干燥器，真空泵，真空壓力表，噴燈，L形五通管，冰箱，低溫冰箱（-30℃），液氮冷凍保藏器。

生物有機(jī)肥產(chǎn)品生產(chǎn)菌種安全性分析

雖然目前生物有機(jī)肥產(chǎn)品生產(chǎn)菌種大多采用植物根際促生菌， 但近年來很多研究發(fā)現(xiàn)，芽孢菌屬和類芽孢菌個(gè)別菌株能產(chǎn)生菌素。 即便在菌種安全分級目錄中列為一級免做理學(xué)試驗(yàn)的菌種， 如枯草芽孢菌、 多類芽孢菌、 地衣芽孢菌等個(gè)別菌株也檢測到部分溶血素基因， 潛在危害不容忽視。 因此， 開展生物有機(jī)肥產(chǎn)品生產(chǎn)菌種生物安全風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)， 從源頭上把好菌種安全關(guān)是產(chǎn)品質(zhì)量安全的首要保障。通過調(diào)研發(fā)現(xiàn)， 用于生物有機(jī)肥產(chǎn)品的部分生產(chǎn)菌種分類地位不明確， 甚至混亂， 難以從源頭上進(jìn)行安全風(fēng)險(xiǎn)的初步識別 。 以常見生產(chǎn)菌種枯草芽孢菌為例， 實(shí)際上是一個(gè)表型相似的群體， 包括枯草芽孢菌、 地衣芽孢菌、 短小芽孢菌、解淀粉芽孢菌、 深褐 （萎縮） 芽孢菌、莫哈韋（莫杰夫） 芽孢菌、 死谷芽孢菌、 索諾拉沙漠芽孢菌、 特基拉芽孢菌、暹羅芽孢菌等 10個(gè)緣種。生產(chǎn)企業(yè)送檢的枯草芽孢菌生物有機(jī)肥產(chǎn)品， 經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)很多產(chǎn)品實(shí)際為解淀粉芽孢菌， 且許多菌株具有很強(qiáng)的溶血作用。通過對生產(chǎn)企業(yè)調(diào)研發(fā)現(xiàn)， 部分生產(chǎn)企業(yè)選擇分離于動物腸道的解淀粉芽孢菌作為產(chǎn)品生產(chǎn)用菌株， 該類菌種生產(chǎn)發(fā)酵周期短、 活菌數(shù)量高、 生產(chǎn)成本低， 但產(chǎn)品的應(yīng)用功效不佳， 溶血風(fēng)險(xiǎn)大 ， 建議慎用。而植物來源的解淀粉芽孢菌溶血風(fēng)險(xiǎn)小， 產(chǎn)品應(yīng)用效果好， 推薦使用。

低溫生物菌種的保存方法有哪些？

（一）培養(yǎng)基保存法

利用各種斜面和半固體培養(yǎng)基，加上石蠟油保存菌種，是一種簡易的保存方法。

1.普通瓊脂斜面保存法：腸道菌、等一般細(xì)菌可接種于不含糖的普通瓊脂斜面上，斜面底部應(yīng)加少許無糖肉膏湯，以防干涸。經(jīng)35℃培養(yǎng)18～24h后，移種于4℃冰箱中，一般可保存一個(gè)月，每月傳代一次。

2.血液瓊脂斜面保存法：鏈球菌、應(yīng)接種于血液瓊脂斜面上，35℃培養(yǎng)生長后，置4℃冰箱中保存，鏈球菌須半個(gè)月至1個(gè)月移種一次，新分離菌株須2～4天移種一次，以后逐漸延長移種時(shí)間，在適應(yīng)后可延至半個(gè)月移種一次。

3.巧克力色斜面保存法：宜保存菌，并在35℃孵箱中保存，一般每2天移種一次。

4.雞蛋斜面保存法：適于保存含有Vi抗原的沙門菌屬及其他含表面抗原的細(xì)菌，一般可保存一個(gè)月。

5.半固體穿刺保存法：將細(xì)菌接種于瓊脂半固體或瓊脂半固體內(nèi)，經(jīng)35℃培養(yǎng)18～24h，再以無菌方法加入滅菌的液體石蠟。高度約lcm，置4℃冰箱保存。保存時(shí)間可達(dá)3～6個(gè)月。

（二）干燥保存法

原理是將細(xì)菌體內(nèi)的水分蒸發(fā)掉，使其處于休眠和代謝停滯狀態(tài)，從而達(dá)到長期保存菌種的目的醫(yī)|學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理。菌種干燥后低溫保存，可保存數(shù)年至十幾年。

（三）冷凍干燥保存法

本法又稱冷凍真空干燥法。它綜合利用了各種有利于菌種保存的因素（低溫、干燥和缺氧等），是目前有效的菌種保存方法之一。用本法保存的菌種具有成活率高，變異性小等優(yōu)點(diǎn)，保存期一般3～5年，有的可長達(dá)10年以上。

（四）脫脂牛奶保存法

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