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PCR實驗室試劑的操作:
⑴所用的所有溶液都應該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
⑵所有PCR試劑中使用的水都應該是高質量的-新鮮蒸餾的去離子水,用0.22μm過濾的,并且是高壓滅菌。
⑶在20℃到25℃貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑,在擴增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴增反應。⑷所用試劑都應該以大體積配制,實驗一下看試劑是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量進行貯存。
⑸所有試劑和樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。
⑹新配制的試劑在用于準備新的標本之前應該加以檢驗。
⑺樣品準備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時都應該小心保存。
擴增反應混合物配制和擴增區(qū)
該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增。此外,已制備的DNA模板 (來自樣本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。
本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內(nèi)進行。
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