流式細胞分選

流式細胞分選技術是利用流式細胞分選儀，以高能量激光照射高速流動狀態(tài)下被熒光色素染色的單細胞或微粒,測量其產(chǎn)生的散射光和發(fā)射熒光的強度,從而對細胞(或微粒)的物理、生理、生化、免yi、遺傳、分子生物學性狀及功能狀態(tài)等進行定性或定量檢測的--種現(xiàn)代細胞分析技術，它可根據(jù)發(fā)射光的熒光強度和波長將發(fā)光顆粒亞群分開并可實現(xiàn)單ke隆分選，能復雜樣本中的細胞進行鑒定、分類、定量和分離,單次可同時對其中一種到四種特定細胞進行超高速分選純化、高通量單分選或細胞芯片制備。分選后的細胞能直接用于培養(yǎng)、移植、核酸提取、單細胞PCR擴增或原位雜交等，可進一步進行細胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同細胞之間的差異化研究。6ml明膠-底物液，約3min，混合液凝固，將培養(yǎng)板取出，置室溫5min，將板倒置，用肉眼和低倍放大鏡計數(shù)所顯示出的顏色的斑點。硬件中樣本細胞丟棄的比例低于5%，保證樣本中目標細胞的高回收率。

細胞培養(yǎng)中常見的生物污染包括細菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點污染、真菌污染和原生動物污染。這些污染在細胞培養(yǎng)中的特點及相應的解決辦法如下：

1.細菌污染

細菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細砂狀。根據(jù)gan染菌的種類不同，可能會呈現(xiàn)不同的形狀，培養(yǎng)液一般會變得渾濁、黃色，對細胞生長有明顯影響。

解決方法：仔細檢查器具的滅菌情況，確保通風時間和高壓滅菌器的壓力是否足夠。重要的是，與培養(yǎng)基接觸的移液管等物品如果被污染兩次，則可能會導致儲存溶液也受到污染。所以一定要注意！下次使用前要檢查培養(yǎng)基的渾濁度。說明密度梯度離心法聯(lián)合差速貼壁法可在體外有效分離培養(yǎng)大鼠骨sui內(nèi)皮祖細胞。此外，建議在培養(yǎng)基中添加抗生su。

細胞培養(yǎng)中常見的污染及解決方法

霉菌污染

正常情況下，培養(yǎng)基在 37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)兩三天，在倒置顯微鏡下仍保持透明，無雜質(zhì)。一旦出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，顯微鏡下可見絲狀和團塊狀漂浮物，菌絲明顯。此時，雖然細胞仍在生長，但它們的生命狀態(tài)會在長時間后逐漸惡化。

解決方法：用硫酸銅溶液擦拭 CO2 培養(yǎng)箱，向托盤中加入飽和硫酸銅或消毒后加入飽和磷酸氫二鈉高鹽溶液，避免霉菌污染。

如果霉菌污染，暫時轉移所有細胞，并立即徹底使用 guo 氧擦拭培養(yǎng)箱，包括層板和內(nèi)壁。將 guo 氧放在培養(yǎng)箱中一小時，使蒸汽擴散，待 guo 氧氣味消散后，將細胞轉移到培養(yǎng)箱中。骨吸收陷窩在共培養(yǎng)7天后開始出現(xiàn),隨著培養(yǎng)時間的延長,陷窩面積呈增加趨勢。值得注意的是，培養(yǎng)箱需要每兩個月定期清洗一次，尤其是在梅雨季節(jié)。用 84 消毒液、清水和 75% 酒精連續(xù)擦拭培養(yǎng)箱，用紫外線照射也是一種有效的方法。

為防止霉菌污染，需添加 3μg/ml 、抑制素、fang

線菌素 D 或青鏈。一旦被污染，就不可能恢復，即使使用上述，也沒有什么區(qū)別。對于支原體污染的細胞培養(yǎng)，選擇是丟棄污染的培養(yǎng)物，并用使用新鮮的無支原體的儲存液，徹底消毒環(huán)境。自噬流檢測自噬是調(diào)節(jié)真核細鵬生長、和能量代謝的重要生物學機制。如果所有的細胞都被污染了，那可能是整個培養(yǎng)系統(tǒng)污染了。因此，必須對培養(yǎng)基和實驗設備進行檢查。如果只是個別污染，可能是操作問題，有必要注意實驗操作步驟的規(guī)范。