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反相分離柱C18的適用范圍

C18反相分離柱廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的提取，藥1物合成研究與開發(fā)，生物制藥等領(lǐng)域。若樣品極性偏大， Rf值非常接近，則不能分離正相模式；終產(chǎn)物要求純度98%以上，采用正相模式達(dá)不到；樣品在正相條件下存在溶解問(wèn)題——不妨考慮采用反相C18模式分離。由于其填料粘合技術(shù)的成熟和良好的分離能力，C18柱已成為日常接觸分離提純研究人員zui多的反相柱。

反相式C18反相分離柱的主要參數(shù)

分離柱C18有多種參數(shù)，大致可分為四個(gè)方面：相鍵(包括修飾、封端)、填充載體(硅膠純度、填充顆粒類型、粒徑、孔徑)、柱體本身(柱效、柱內(nèi)徑、柱長(zhǎng))和隱藏參數(shù)(比表面積、碳含量等)。小編想選擇以下幾個(gè)大家容易忽略的

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反向作用機(jī)制：

反相萃取分離主要是利用固相萃取材料官能團(tuán)與目標(biāo)化合物碳?xì)滏I之間的非極性作用力。反相非極性的 SPE柱通常更適合從極性基質(zhì)中提取分離出非極性和中等極性的目標(biāo)化合物。

對(duì)利用非極性作用力吸附于非極性 SPE柱的目標(biāo)化合物，可用氯1仿、環(huán)己1烷、乙1酸乙1酯等具有非極性的溶劑洗脫。當(dāng)溶劑的洗脫強(qiáng)度足夠大，可以使目標(biāo)化合物與吸附劑非極性基團(tuán)間的范德華力不受影響時(shí)，使其在 SPE柱中順利洗脫。即使是極性更強(qiáng)的甲1醇，對(duì)許多化合物而言，也有足夠的非極性力量來(lái)洗脫它。有時(shí)候，單種溶劑無(wú)法完全洗脫疏水性的目標(biāo)化合物，可以考慮使用二氯甲1烷：乙1酸乙1酯(1:1，體積比)。

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洗滌劑和洗脫劑的優(yōu)選

反相型和正相型洗脫液的洗脫強(qiáng)度應(yīng)分別增加和降低，但對(duì)回收率無(wú)明顯影響；

就反相模式而言，可先對(duì)目標(biāo)化合物的水溶液上樣，然后以5%、10%、20%、30%、40%、50%、70%、80%、90%、的甲1醇水溶液進(jìn)行洗脫，分別收集洗脫液分析，建立淋洗曲線，確定目標(biāo)化合物被洗脫時(shí)的溶劑體系，淋洗液中甲1醇的含量應(yīng)略低于目標(biāo)化合物正好被洗脫時(shí)的溶劑體系，而洗脫液中甲1醇的含量應(yīng)略高于目標(biāo)化合物正好被完全洗脫時(shí)的溶劑體系；當(dāng)純甲1醇無(wú)法洗脫目標(biāo)化合物時(shí)，則應(yīng)測(cè)試甲1醇-甲1基叔丁基1醚混合溶液的洗脫曲線；如果離子型化合物既不溶于水也不溶于甲1醇，則可在溶劑體系中添加酸或堿。

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凈水系統(tǒng)

鍵合相位是非極性的，碰到水C18鏈就會(huì)被排斥，導(dǎo)致C18 “倒伏”，色譜峰變差，保留變?nèi)酰此辔唤?，所以大多?shù)C18反相分離柱不能用純水作流動(dòng)相。一般選用C18-AQ反相柱分離親水化合物，走水體系，提高保留值。

防腐鹽

單獨(dú)用酸或堿來(lái)調(diào)節(jié)流動(dòng)相中的 PH值，由于分離成分的多樣性，未必能達(dá)到實(shí)驗(yàn)所要求的效果。一般做法是：以緩沖鹽制備流動(dòng)相。但是有些緩沖鹽會(huì)析出不易觀察的微晶：過(guò)濾后，改變流動(dòng)相的組成；不過(guò)濾時(shí)，晶體會(huì)損壞管柱，也容易堵塞管道，污染檢測(cè)器。所以，在滿足實(shí)驗(yàn)條件的情況下，盡量選擇不容易析出的緩沖鹽，分離結(jié)束后，一定要清洗柱子和整個(gè)分離系統(tǒng)，避免出現(xiàn)色譜性霉菌。為便于制備和處理，常選用揮發(fā)性鹽類，如銨鹽等。

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固相萃取柱(英文，簡(jiǎn)稱 SPE柱，或 Solid Phase extraction Cartridges，簡(jiǎn)稱 SPE柱，簡(jiǎn)稱 SPE柱)是一種從層析柱中提取、分離和濃縮樣品的前處理設(shè)備。本發(fā)明主要用于各種食品、農(nóng)畜產(chǎn)品、環(huán)境和生物樣品中的樣品預(yù)處理。固相萃取技術(shù)已廣泛應(yīng)用于眾多國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T)和工業(yè)分析標(biāo)準(zhǔn)。

固相萃取柱容是固相萃取柱內(nèi)填料的吸附能力。硅膠基質(zhì)固相萃取柱的容量一般為1~5 mg/100 mg，即柱容為填充量的1%~5%。粘接硅膠離子交換吸附劑的容量則用 meq/g表示，即每克填料的容量為 X毫克當(dāng)量。這種填料的容量一般為0.5~1.5 meq/g。

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該方法以液-固相色譜理論為基礎(chǔ)，采用選擇性吸附、選擇性洗脫等方法對(duì)樣品進(jìn)行富集、分離、凈化，它是液-固相物理萃取過(guò)程，也可將其近似視為簡(jiǎn)單的色譜過(guò)程。利用液相色譜法分離選擇性吸附和選擇性洗脫 SPE原理。

通常采用的方法是使液體樣品溶液通過(guò)吸附劑，將其保留在被測(cè)物質(zhì)中，然后選擇適當(dāng)濃度的溶劑沖去雜質(zhì)，然后用少量的溶劑對(duì)被測(cè)物質(zhì)進(jìn)行快速洗脫，從而實(shí)現(xiàn)快速分離、凈化和濃縮。

還可以選擇性地吸附干擾雜質(zhì)，讓被測(cè)物質(zhì)外流；或者同時(shí)吸附雜質(zhì)和被測(cè)物質(zhì)，再用適當(dāng)?shù)娜軇┻x擇性地洗脫。