備型柱子柱壓上升，柱效下降，怎么辦？

對高的價值的制備柱來講，延長柱子壽命是很重要的。一般要注意保護(hù)柱子，一般來說，制備柱子一般需要保護(hù)柱配套。

下面是可能堵塞柱子的原因：

（1）如果您所分離的樣品中雜質(zhì)較多而您在上樣前沒有經(jīng)過過濾（0.45微米），一些顆粒性雜質(zhì)會積聚在柱頭造成柱壓升高。

（2）也有可能是因為您所使用的流動向中含有緩沖鹽的原因，結(jié)晶或發(fā)生化學(xué)變化而堵塞?？梢园阎記_一沖。

（3）流動相是否符合液相色譜的要求？是否過濾處理？

反相色譜分離純化后，怎樣除去流動相產(chǎn)品中的TFA和乙腈或其他雜質(zhì)？

TFA是反相色譜分離中常用的添加劑。可以用凍干的辦法去除，國外許多文獻(xiàn)是這樣報道的。還可以試試離子交換、凝膠層析、甚至透析和超濾，其中，離子交換層析效果比較好，還可以起到濃縮樣品的作用。

首先，凍干的辦法應(yīng)該可以幾乎完全地除去TFA和乙腈，藥品實驗前盡量先檢測一下凍干品中的殘留量，只要不超過允許范圍，這種辦法是很簡單、有效的。

其次，如果你的藥品的分裝量不大的話(<100ug)，建議你用離子交換層析，盡量裝一個小一點兒的柱子，讓含鹽洗脫峰的蛋白濃度達(dá)10mg/mL以上，稀釋后完全符合試驗要求。如果用分子篩，考慮稀釋，盡量也先過一個離子交換。此外可以試試疏水層析。如果產(chǎn)品是堿的話，可能會形成TFA鹽，這樣通過上述方法就無法除去。一般可以用堿水洗，然后將產(chǎn)品萃取出來?；蛘咴诶锩婕尤胍欢康柠}酸，再干燥后形成鹽酸鹽。

工業(yè)制備色譜

蛋白質(zhì)的特點使得其分離過程與傳統(tǒng)化工分離過程有著極為不同的特點:(1)分離對象是具有特定的生物活性的生物大分子產(chǎn)品，分離過程設(shè)計中不恰當(dāng)?shù)奈锢砗突瘜W(xué)環(huán)境等(如溫度、PH值、緩沖液選擇、、攪拌和剪切力等)皆有可能引起其蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而使之失活;(2)由于發(fā)酵液、細(xì)胞培養(yǎng)液或勻漿液中，我們所需要的目標(biāo)產(chǎn)物往往存在于含有許多性質(zhì)十分相似的雜質(zhì)的稀溶液中，如何從這樣一種復(fù)雜的稀溶液中經(jīng)濟(jì)有效地提取產(chǎn)物是生物分離技術(shù)面臨的重大課題;(3)從衛(wèi)生和安全角度出發(fā)，對于用基因工程產(chǎn)品，有著極高的純度和同一性要求，對其中的有害雜質(zhì)去除率要求極高，對分離設(shè)備材質(zhì)和分離過程中引入的分離介質(zhì)也有著嚴(yán)格的限制。