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武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業(yè)從事生物醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)、技術(shù)咨詢及產(chǎn)品開發(fā)的生物技術(shù)服務(wù)企業(yè)。公司長(zhǎng)期致力于建立并完善多項(xiàng)基礎(chǔ)生物技術(shù)服務(wù)平臺(tái)?,F(xiàn)憑借自身技術(shù)特色,依托光谷生物城技術(shù)產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢(shì),面向全國(guó)提供的生物技術(shù)服務(wù)。
FISH:采用了已知序列的、特異性的單鏈核酸作為探針,標(biāo)記了生物素或熒光素,在一定的溫度和離子濃度下通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)法則,使得DNA-DNA原位雜交,采用熒光法顯示,將DNA在細(xì)胞爬片、組織切片(石蠟切片or冰凍切片)的原始位置上標(biāo)記出來(lái)的一種技術(shù)。武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司。
石蠟切片的FISH要點(diǎn)
(1)組織固定,采用PH7.2的10%甲醛固定24h是比較適合的,PH很重要。較厚的組織塊建議切開后再固定。這一點(diǎn)小編已經(jīng)反復(fù)提過(guò)很多次了。良好的固定是所有病理實(shí)驗(yàn)的前提。
(2)對(duì)于石蠟切片來(lái)說(shuō),采用蛋白酶K作為消化液是更優(yōu)的選擇。消化條件20g/L蛋白酶K在50℃下消化20min。胃蛋白酶是極易失活的,失活了就沒(méi)法充分消化,消化過(guò)度又會(huì)使細(xì)胞核變模糊。綜合來(lái)看,小編更推薦蛋白酶K。
(3)石蠟切片的雜交溫度一般都是37攝氏度。而雜交時(shí)間則需要摸索才能得到更佳時(shí)間。不過(guò),一般的過(guò)夜孵育基本可以達(dá)到目的。
(4)FISH實(shí)驗(yàn)中非特異性著色是個(gè)難以避免的問(wèn)題,我們能做的就是盡量減少背景。具體可作為的地方:充分嚴(yán)格漂洗、全程避免干片、探針濃度不宜太高、雜交溫度要控制在37℃。